不同时期大蒜中多糖组分c的含量测定论文

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1、不同时期大蒜中多糖组分C的含量测定论文余薇王秀红陈凤吴基良闵清【摘要】目的对不同时期的大蒜多糖组分C进行提取纯化并测定其含量。方法用无水丙酮提取的方法分离纯化大蒜多糖组分C,以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度,测定波长486nm。结果在4.0~10.0μg/ml范围内,浓度与吸光度呈良好线性关系,回归方程A=0.0694C-0.0049(R=0.9996,n=7)。不同时期的大蒜中多糖组分C的含量:2月份的含量87.82%,4月份的含量88.52%,6月份的含量93.61%.freelsativumL.的鳞茎,

2、其性味生辛热、熟辛温,具有温中消食、化肉消谷、解毒除邪、攻冷积和杀虫的功效,作为中药使用已有几千年的历史。我国是世界上最大的大蒜生产国。目前,从天然产物中寻找新的药效成分已成为国际上研究的新动向,多糖的研究颇受关注。多糖是由十个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖。它在自然界分布极广,在高等植物、藻类、菌类及动物体内均有存在,是自然界含量最丰富的生物聚合物。大蒜多糖是从大蒜球根中提取的活性成分,本科室通过大量的实验研究发现大蒜多糖具有保肝护肝作用[1,2]、抗病毒[3,4]、保护心肌[5]等作用。大蒜采收期为每年的6~7月份,

3、为了更合理地开发利用,我们对不同时期大蒜中的多糖组分C进行糖含量比较分析,旨在为大蒜多糖C的药效学研究提供基础资料。1器材1.1药材市售山东产大蒜。1.2试剂葡萄糖标准品,上海化学试剂公司;苯酚,上海化学试剂公司;硫酸(分析纯),上海化学试剂有限公司;95%乙醇;蒸馏水。1.3仪器UV-754型紫外可见分光光度计(澳大利亚VARIAN公司);TD-II台式低速自动平衡离心机(湖南星科科学仪器有限公司);FA1104电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。2方法与结果2.1大蒜多糖组分C的分离纯化新鲜大蒜去皮→碾成蒜泥→

4、无水乙醇浸泡过夜→尼龙布过滤→沉淀用无水乙醇浸泡1h→尼龙布过滤→沉淀用无水乙醇浸泡24h→尼龙布过滤→沉淀(即脱脂蒜泥)用双蒸水溶解→沸水浴8h→冷却→尼龙布过滤→滤液中滴加4~5倍无水乙醇→静置72h→抽滤→滤液68℃水浴约8h蒸出乙醇→滤液中滴加3~4倍丙酮→静置6h→抽滤→得大蒜多糖组分C粗品。粗品Sevage法去蛋白后在55℃下干燥至恒重得大蒜多糖组分C精制品。纯化后得大蒜多糖组分C在紫外可见光谱段进行扫描,结果显示在190nm处有多糖的特征吸收峰,而在260nm和280nm处无吸收,表明大蒜多糖组分C中无蛋白

5、质成分。见图1。2.2溶液的配制2.2.15%苯酚溶液的配制取苯酚100g,加铝片0.2g和NaHCO30.1g,蒸馏。收集180~182℃馏分,精密称取精制苯酚5.0g溶解后转至100ml容量瓶中定容,摇匀,得5%苯酚试剂。2.2.2标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10.0mg置100ml容量瓶中,加水溶解,稀释至刻度,摇匀即得浓度为100μg/ml的标准品溶液。2.2.3供试品溶液的制备精密称取55℃下干燥至恒重的大蒜多糖组分C5.0mg,置100ml容量瓶中,加双蒸水溶解,稀释至刻度,摇匀即得多糖

6、供试品溶液50μg/ml。2.3检测波长的选择精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液1.0ml分置于两支干燥试管中,分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀,然后加入浓H2SO45.0ml摇匀,另以1.0ml水同上操作,作为空白液,于室温中放置5min,沸水浴中恒温15min,取出,冰水浴冷却至室温,在波长400~800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在486nm波长处均有最大吸收,而空白溶液在此波长无干扰,故选用486nm为检测波长。见图2~3。2.4标准曲线的测定精密量取标准品溶液0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9

7、,1.0ml,分别置7只试管中,各加蒸馏水至1.0ml,再加5%苯酚溶液1.0ml,摇匀后再加入浓H2SO45.0ml,摇匀,室温下放置5min,沸水浴中恒温15min,取出,冰水浴冷却至室温,在486nm处,以蒸馏水管作为空白对照,测定各浓度标准液的吸光度,以糖浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方程A=0.0694C-0.0049(r=0.9996,n=7),在4.0~10.0μg/ml范围内,浓度与吸光度呈良好线形关系。2.5换算因子f的测定精密称取55℃下干燥至恒重的不同时期提取的大蒜多糖组分

8、C10.0mg,置100ml量瓶中,加适量双蒸水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为多糖储备液(100μg/ml)。精密吸取多糖储备液2.0ml,.freelg);C为多糖溶液中葡萄糖的浓度(μg/ml);D为多糖的稀释因素。见表1。表1不同时期大蒜多糖组分C的换算因子2.6精密度实验随机取标准曲线绘制中其中一支葡萄糖试管液

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