大蒜多糖组分b的纯化与糖含量测定

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1、大蒜多糖组分B的纯化与糖含量测定：余薇,查文良，夏勇，吴基良，陈凤【摘要】　　目的建立苯酚－硫酸法测定大蒜多糖组分B的含量。方法采用醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分B，以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度,测定波长486nm。结果在4.0～10.0μg/ml内，浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程：A=0.0694C-0.0049(r=0.9996，n＝7)，平均回收率为101.27％，RSD为1.9％。大蒜多糖组分B的平均糖含量为83.37%，RSD为2.5％(n=5)。结论该方法简便、准确、精密度高、重现性好,为生产

2、的质量控制及进一步研究奠定良好的基础。【关键词】大蒜多糖组分B苯酚-硫酸法含量测定　　Abstract:ObjectiveTodevelopphenol-sulfuricacidmethodforthedeterminationofpolysaccharidesBfromgarlic.MethodsGarlicPolysaccharidesBinedbyphenol-sulfuricacidat486nm.ResultsIntherangeof4.0～10.0μg/ml,theregarlicethodissimpleanda

3、ccurateanditcanbeusedforthequalitycontrolofpolysaccharidesformgarlic.　　Keyination　　多糖的研究起自20世纪60年代，从20世纪70年代开始逐渐发现多糖及其复合物(蛋白多糖和脂多糖)具有多方面的药理作用，主要包括：增强免疫、抗肿瘤、活血抗栓、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、增强骨髓造血机能、抗辐射、对肝肾等主要脏器具有保护作用。中药多糖的化学研究范围涉及提取、分离、纯化等方面［1,2］。目前我国对大蒜多糖的研究主要在于药理方面［3,4］，涉及结构分

4、析、定性定量、分子量确定等领域较少。大蒜多糖是大蒜的醇沉部分，有大蒜多糖组分A、B和C3种成分，笔者对大蒜多糖组分B进行了含量测定，旨在为大蒜多糖的研究提供基础资料。　　1材料与仪器　　1.1药材市售山东产大蒜。　　1.2试剂葡萄糖标准品，上海化学试剂公司；苯酚，上海化学试剂公司；硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司；95％乙醇；蒸馏水。　　1.3仪器UV-754型紫外可见分光光度计；FA1104电子分析天平。　　2方法与结果　　2.1大蒜多糖组分B的分离纯化新鲜大蒜去皮碾碎，无水乙醇浸泡脱脂，在沸水浴中用4～5倍双蒸馏水提取

5、8h，滤液用乙醇沉淀，得多糖组分B粗品，粗品用Sevage法去蛋白后在55℃下干燥至恒重得大蒜多糖组分B精制品。纯化后大蒜多糖在紫外可见光谱段进行扫描，结果显示在190nm处有多糖的特征吸收峰，而在260和280nm处无吸收，表明大蒜多糖组分B中无蛋白质成分。见图1。　　2.2试剂的配制　　2.2.1标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖7.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为70μg/ml的标准品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备精密称取55℃干燥至恒重的大蒜多糖组分B10.0mg置

6、100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的多糖供试品液。　　2.2.35%苯酚试剂的配制取苯酚100g，加铝片0．2g和NaHCO30.1g，蒸馏,收集180～182℃馏分。精密称取精制苯酚5.0g以蒸馏水溶解后转至100ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。　　2.3检测波长的选择精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液1.0ml分置于两支干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml摇匀，另以1.0ml水同上操作，作为空白液，于室温中放置5min，沸水浴中恒温15mi

7、n，取出，冰水浴冷却至室温，在波长400～800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在486nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用486nm为检测波长。见图2～3。　　2.5换算因素的测定精确量取供试品溶液2.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素f＝1.11。　　f=l），D为多糖的稀释倍数。　　2.6精密度实验随机取标准曲线绘制中其中一支葡萄糖试管液，反复测量该标准液的吸光度5次，RSD=0.18％。结果见表1。表1精密度实验（略）　　2.7稳定性实验精密量取50μg/ml多糖样

8、品1.0ml，按测定标准曲线同样的方法操作每隔20min测定吸光度1次，观察的样品溶液在100min内吸光度的变化情况，算得吸光度的RSD=0.23％，结果表明样品溶液在100min内显色稳定。结果见表2。表2稳定性实验（略）　　2.8重现性实验精密称取同一批次大蒜多糖组分B