大蒜多糖组分a总多糖含量的分光光度法测定

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1、大蒜多糖组分A总多糖含量的分光光度法测定：余薇，查文良，梁惠敏，吴基良，刘彤云【摘要】　　目的　对大蒜多糖组分A进行提取并测定其含量。方法采用0.5%草酸铵溶液提取、醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分A，以苯酚-硫酸显色法测定大蒜多糖组分A的含量。结果在2.0～15.0μg/ml内，浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程：A=0.0806C-0.0219(r=0.9934，n＝10)，平均回收率为96.14％，RSD％为0.06（n＝5）。大蒜多糖组分A的平均糖含量为77.40%，RSD％为3.74（n＝5）。结论方法简便，结果准确，为今

2、后对大蒜多糖的药理作用以及其它组分进一步研究奠定良好的基础。【关键词】大蒜多糖组分A;Sevage法;苯酚-硫酸法；多糖　　Abstract：ObjectiveThepolysaccharidesAgarlicandthecontentined.MethodsPolysaccharidesAmoniumoxalateandethanolprecipitation,thecontentinedbyphenol-sulfuricacidunder485nm.ResultsFromtherangeof2.0-15.0μɡ/ml,there

3、garlicethodissimpleandaccurate.　　Key处无吸收，表明大蒜多糖组分A中无蛋白质成分，而在190nm处有多糖的特异性吸收峰。见图1。　　2.2试剂的配制　　2.2.1标准品溶液的制备　　精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的标准品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备　　精密称取55℃干燥至恒重的大蒜多糖组分A10.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的多糖供试品液。　　2.2.

4、35%苯酚试剂的配制　　取苯酚100g，加铝片0．2g和NaHCO30.1g，蒸馏。收集180～182℃馏分，精密称取精制苯酚5.0g溶解后转至100ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。　　2.3检测波长的选择　　精确量取80μg/ml的葡萄糖溶液1.0ml，样品溶液1.0ml置干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml摇匀，另以1.0ml水作同上操作，作为空白液，于室温中放置5min，沸水浴中恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长200～800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在4

5、85nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长处无干扰，故选用485nm为检测波长。见图2～3。　　2.5换算因素的测定　　精确量取供试品溶液2.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素f＝2.0078。f=l），D为供试品溶液的稀释倍数。　　2.6精密度实验　　随机取“标准曲线绘制”项中其中一支葡萄糖试管液，置于光度计中，反复测量该标准液的吸光度5次，结果RSD=0.21％。见表1。表1精密度实验（略）　　2.7稳定性实验　　精密量取50μg/ml多糖样品1.0ml，按测定标准曲线同样的方法每隔20min测

6、定样品溶液吸光度，观察100min内吸光度的变化情况，算得吸光度的RSD=0.13％，结果表明样品溶液在100min内显色稳定。见表2。　　2.8重复性实验　　精密称取同一批次大蒜多糖组分A10mg各5份，分别置于5个100ml容量瓶中定容，精密量取100μg/ml多糖样品溶液5.0ml于10ml容量瓶中，稀释成50μg/ml的样品溶液，各取1.0ml于5支干燥试管中,按测定标准曲线同样的方法操作,在485.0nm处分别测定其吸光度，算得其RSD=3.74％。表2稳定性实验（略）　　2.9多糖含量的计算　　精密称取多糖10.0mg，

7、用蒸馏水溶解后定容到100ml，精密量取100μg/ml多糖溶液5ml至10ml容量瓶中稀释至50μg/ml的样品溶液。取样品液1.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度，算得平均糖含量为77.40%。见表3。表3多糖含量的计算（略）　　多糖含量(%)=(C·D·f)/l)；D为样品溶液的稀释倍数；f为换算因素；l于试管中，加入与样品浓度相近的葡萄糖对照品溶液1.0ml，按测定标准曲线同样的方法操作，算得样品的平均加样回收率为96.14％，RSD=0.06％,表明本方法准确度良好。　　3讨论　　多糖广泛存在于自然界，是多种中草药

8、的有效成分之一，具有多种生物活性，本文运用醇沉法从大蒜中提取大蒜多糖组分A,并运用苯酚—硫酸比色法对其含量进行了测定，苯酚—硫酸比色法为多糖含量测定的经典方法，本实验中该方法的原理是大蒜多糖在硫酸的作用下，先水解为单糖，单糖迅速脱水形