ace抑制剂对心衰大鼠心肌细胞钙瞬时变化及其调控蛋白影响论文

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1、译山支擘{!雩-g话点AGE抑剜荆司一隶土最d舾钿臆搴丐珥_口盘亿直舆佣糠譬面的Ij而在的影响作用，它可通过此作用来改变心肌细胞的钙瞬变及其收缩特性。心力衰竭中，ACEI的治疗作用除可通过降低心脏的后负荷，改善心肌的纤维化，抑制心肌的重构等来介导外；就心肌细胞本身而言，ACEI有可能通过抑制AngII的形成或借助其他途径，改善心衰时心肌细胞的钙瞬变及其调控蛋白的异常，通过直接提高心肌的收缩特性来增强心脏的舒缩功能。为此曾有研究者对其中的一些方面进行过探讨，但没有统一的认识。而有关ACEI在心衰治疗中对FFR的影响方面，目前的研究更是不多。故本课题通过给予实验性心

2、衰大鼠长程的ACEI治疗，观察其对心肌细胞的收缩特性、钙瞬变、钙调控蛋白，及其它们相互关系的影响，旨在心肌收缩舒张的分子基础水平了解ACEI的抗心衰作用。研究目的本课题拟通过缩窄雄性Wistar大鼠的腹主动脉，制成压力负荷增加性心衰模型。然后给予3个月的ACEI(perindopril)进行干预治疗，在观察ACEI对大鼠血流动力学影响的同时，一方面分离心肌细胞，在电刺激起搏的情况下，应用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞的收缩情况和钙瞬变；另一方面对钙调控蛋白的转录和翻译水平进行半定量测定。旨在：(1)研究心衰时ACEI的长程干预对单个心肌细胞的收缩特性，及收缩力

3、．频率关系的影响；(2)观察心衰时ACEI的干预对单个心肌细胞的钙瞬变，及钙瞬变一频率关系的作用；(3)Y解ACEI的干预对心衰心肌的主要钙调控蛋白NCXl、SERCAz、PLB的转录和翻译水平的影响；(4)探讨心肌细胞的收缩特性、钙瞬变及其调控蛋白的关系及ACEI干预后的影响作用。研究方法1、大鼠压力负荷增加性心衰模型的制作通过缩窄雄性Wistar大鼠(8周龄，体重200～2509)的腹主动脉，造成50％以上的狭窄，增加左心室后负荷。并用超声心动图动态监测其心功能变化，术后16周末发现其有明显的心功能受损，并测定血流动力学参数进一步确定。3一中山走掌博士抡支A

4、GE押别科i咛d毒太鬣d肌细胞移嚼对主犯厦善‘田糖葺白的影响2、实验分组和步骤术后16周末，将心衰大鼠随机分成心衰治疗组(c}珂一T，n=16)和心衰对照组(CHF—C，n=16)，并将假手术者作为假手术对照组(PS，n=10)。然后通过灌胃的方法每天给予心衰治疗组培哚普利(3mg／kg，用生理盐水溶解)，而心衰对照组和假手术对照组则用生理盐水代替。持续12周后从各组存活的大鼠中随机选取4只，用于分离心肌细胞，进行单个细胞收缩功能和钙瞬变的检测。其余的进行血流动力学测定，并取左心室肌进行钙调控蛋白的mRNA及蛋白水平的半定量分析。3、成年大鼠心肌细胞的分离及单个

5、心肌细胞收缩功能与钙瞬变的测定成年大鼠的心肌细胞通过主动脉灌流的方法应用胶原酶I进行分离。分离完成后用钙荧光探针Fluo．3／AM进行负载。然后在不同频率(o5、t．0、1．5、2,0Hz)的电刺激起搏T(Sms，35Ⅵ，用激光扫描共聚焦显微镜动态记录单个心肌细胞的收缩舒张过程和细胞内的荧光强度(F)变化。并按[ca2+]=Kdx(F．Fmin)／ffm,mx-F)计算细胞内游离钙离子的浓度(nmol／L)，其q6Fmax为每次实验测定完成后加入钙离子载运体A23187(终浓度为101．tM)，使荧光指示剂饱和后所测得的胞内最大荧光值，Fmin为加入MnCl2(

6、终浓度)b2mmol／L)使荧光淬灭后所测得的心肌细胞的最小荧光值，Kd为一常数，37。C为450nmol／L。从而可测定出心肌细胞的缩短分数、钙瞬变的大小与刺激频率和实验分组的关系。4、钙调控蛋白的转录和翻译水平的半定量分析采用RT-PCR的方法，以B．Actin为内参分别测定NCxl、SERCA2、PLBI拘mRNA在各组中的转录水平。分别应用免疫荧光和wbstembIot等方法测定各组中NCXl、SERCA2、PLB蛋白相对表达量。一4!圭查兰塑主丝圭?峰曼塑蔓牵j对d毫太寰d肌佃胞钙礴耐童似矗善谰_I圣母匆秭彤响实验结果1、心衰模型的建立经超声心动图动态

7、测定，缩窄腹主动脉的大鼠在16周末，其EF、FS分别为32．3±3．0、15．6±1．6％，明最低于缩窄后的第8、12周末(P均<005)：且也分别较假手术大鼠16周末的EF(5844-58)、FS(n7--+4．0)为低(P均

8、．C和PS组分别在LVE