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《肺纤维化进程中NF-κB对Nfr2信号通路的调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、博莱霉素诱导过程中人肺泡上皮细胞的NF・kB对Nfr2信号通路的调控机制研究赵印敏1,汤屮文彳，郑卉2,粟波】，唐亮】，陈昶21.同济大学附属上海市肺科医院中心实验室，2.胸外科200433,3.武汉市医疗救治中心430023通讯作者：陈昶，changchenc@hotmail.com200433基金项目:上海市科委项目(10JC1413500)【摘要】目的观察II型人肺泡上皮细胞A549中NF・kB/p65基因沉默前后Nrf2及其相关表达产物含量的变化，并探讨博莱霉素诱导的过程中NF・kB对Nrf2信号通路的调控机制。方法运用慢病毒技术沉默II型人肺泡上
2、皮细胞A549中的NF・kB/p65基因，利用荧光定量PCR检测博莱霉素诱导前后人肺泡上皮细胞的Nrf2>Keapl、Cul3、Rbxl、PKC、PI3K、ERK、NF-kB/p65、IkB的mRNA的表达量，应用流式细胞术AnnexinV-RFP单染法检测各实验组的细胞凋广率，利用Western-blot检测NF-kB/p65>Nrf2及其相关蛋白的表达量。结果慢病毒感染A549细胞后有效地沉默了NF・kB/p65基因表达，博莱霉素诱导后NF-kB/p65沉默的人帅泡上皮细胞屮Nrf2表达量明显上升并与NF・kB/p65、IkB、Keapl、Cul3、R
3、bxl呈负相关，PI3K表达增加而PKC、ERK无明显变化，其凋亡率与对照组相比出现增高。讨论在博莱霉素诱导的过程中，人肺泡上皮细胞的NF-kB/p65可以抑制Nrf2的功能。在NF-kB/p65沉默的情况下，Nrf2通过PI3K途径并同时降低Kcapl-Cul3-RBxl复合物表达实现活化，启动其下游的抗氧化反应，减少博莱霉素导致的氧自由基对细胞的损伤。【主题词】肺纤维化；NF・kB；Nrf2；信号转导；MechanismofNF-kBsignalingpathwayregulatedNfr2inhumanalveolarepithelialcellsb
4、yBleomycin-inducedZHAOYin-min1,TANGZhong-wenZHENGHui2,SUBo1,TANGLiang1,CHENChang21.CentralLaboratoiy;2.DepartmentofThoracicSurgery,ShanghaiPulmonaryHospital,TongjiUniversity,Shanghai200433,China.3.Wuhanmedicaltreatmentcenter,Wuhan,430023,China[ABSTRACT]Objective:ObserveNrf2andits
5、relatedgeneexpressionchangesaftersilencingofNF-KB/p65inhumanalveolarepithelialcellandtoexplorethemechanismofNF-kBsignalingpathwayregulatedNrf2expressionbybleomycin-induced.Methods:SilencingofNF-KB/p65usinglentiviraltechnologyinhumanalveolarepithelialcell.UsingquantitativePCRdetect
6、mRNAexpressionofNrf2,Keapl,Cul3,Rbxl，PKC,PI3K,ERK,NF-KB/p65,IkBinhumanalveolarepithelialcellsbyBleomycin-induced.CellapoptosisweredeterminedbyAnnexinV-RFPsinglestaining.NF・KB/p65,Nr£2andtheassociatedproteinexpressionweredetenninedbywestern-blotting.Result:Lentiviralinfectedcellsef
7、fectivelysilencegeneexpressionNF・KB/p65.HumanalveolarepithelialcellwhichNF・KB/p65silencedsignificantlyincreasedtheexpressionofNrf2afterBleomycin-inducedandNF・KB/p65,IkB,Keap1,Cul3,RbxlexpressionwasnegativelycorrelatedandincreasedexpressionofPI3KandPKC,ERKnosignificantchange.Apopto
8、siscellsappearhigherwhencomparedw
