手性分析柱知识介绍

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1、手性色谱柱知识介绍手性色谱柱(ChiralHPLCColumns)是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相(ChiralStationaryPhases)。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的kl的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固立相ZI'可至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、H-JI作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与

2、分析物的键介等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。。在手性拆分屮，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。迄今为止,尚没有一种类似十八烷基键介硅胶(ODS)柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性林，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。根据手性固处相和溶剂的相互

3、作用机制，IrvingWainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、兀-介作用、偶级-偶级作用形成复介物。第2类：既有类型1屮的相互作用，乂有在包埋复介物。此类手性色谱柱屮典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。第3类:基于溶剂进入手性空处形成包埋复介物。这类手性色谱柱屮最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性林[2],另外冠醸型手性柱和螺旋型聚合物，如聚(苯基甲基甲基内烯酸酯)形成的手性色谱柱也属于此类。第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发

4、的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱(CLEC)o第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考IrvingWainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：刷(Brush)型或称为Prikle型纤维素(Cellulose)型环糊精(Cyclodextrin)型大环抗生素(Macrocyclicantibiotics)型蛋白质(Protein)型配位交换(ILi

5、gandexchange)型冠僦(Crownethers)型刷型：刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bi11Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，BillPrikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究屮，通过不断实践，发明了应用范砌较广、柱效很好的手性色谱柱。刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于IrvingWainer分类中的第一种类型。刷型手性固定相分为电了接受型和n电了提供型两类。最常见的兀电了接受型固定相是山(R)-N-3,5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到Y-氨丙基硅胶

6、上的制成。此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供兀电子的芳香族化合物，或用氯化荼酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。31电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的荼基氨基酸衍生物，这种固定相耍求被分析物具有JT电子接受基团，例如二硝基苯甲酰基。醇类、竣酸类、胺类等，町以用氯化二硝基苯甲酰、异腊酸盐、或二硝基苯胺等进行衍生化后，用兀电了供给型固定相达到手性分离。刷型固定相的优势在于其易于合成。合成方法在B订1Prikle的著作中冇详细的说明。另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的选择因子。它的

7、不利之处在于它仅对芳香族化合物有效，有时不得不进行衍生化反应。但值得-•提的是，这种衍生化反应是非手性衍生反应，所以不存在手性衍牛的问题。刷型手性色谱使用的流动相基本是极性弱的有机溶剂，这对于制备色谱来讲未必是缺点。近來，刷型固定相岀现了n电子供给和接受基因的混合固定相。如:WI1ELK-0和BLAMO,及a-BURKE-II固定相。a-BURKE-II相十分适用于B-阻断剂的手性分离。典型的流动相为二氯甲烷-乙醇-卩醇混合物，比例为85：10：5。加入10mM醋酸钱可以调整保留时间。SSBLAMO

8、II，同时具有兀电子供体区和受体区，形成手性裂缝，因此对于某些分子具有很高选择性。纤维素型：纤维素型手性色谱柱的分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物。它们属于Wainer分类中的第2种类型。市售的手性色谱柱为微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸盐纤维素固定相。很多化合物可通过此类型的色谱柱得到分离。这种类塑的手性色谱柱种类也很齐全。流动和使用低极性溶剂，典型的流动和为乙醇-己烷混合物。但特别要注意由于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中无含氯溶剂。