嗜热菌Thermus thermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯化及催化特性分析

《嗜热菌Thermus thermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯化及催化特性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Ｑ７单位代码：１０１８３研究生学号：２００５３４Ｅ００４密级：公开吉林大学硕士学位论文专业学位（）ｅ嗜热菌ｈｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ半乳糖激酶Ｔｔｈ０８２５的克隆、表达、纯化及催化特性分析Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃｇａｌａｃｔｏｓｅｋｉｎａｓｅＴｔｈ０８２５ｆｒｏｍＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ作者姓名：赵霞专业：生物工程领研究方向生物工程

2、指导教师：高仁钧教授培养单位：生物工程学院２０１８年１１月未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成

3、果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：＂日期：年月日嗜热菌Thermusthermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯化及催化特性分析Cloning,expression,purificationandcharacterizationofathermophilicgalactosekinaseTth0825fromThermusthermophilus作者姓名：赵霞领域（方向）：生物工程指导教师：高仁钧教授

4、学位类别：生物工程学院论文答辩日期：2018年11月23日中文摘要嗜热菌Thermusthermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯化及催化特性分析背景和目的：半乳糖激酶是一种磷酸转移酶，以一分子腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）为磷酸基团供体催化α-D-半乳糖磷酸化生成半乳糖1-磷酸和腺嘌呤核苷二磷酸（ADP）。半乳糖激酶在体内的功能是参于β-D-半乳糖向1-磷酸葡萄糖的分解代谢。半乳糖激酶首先从哺乳动物肝脏中分离出来，并且广泛存在于酵母，古细菌和植物中。实验方法：以ThermusthermophilusJCM10941

5、基因组为模板，通过PCR完成对tth0825基因的扩增，以pET28a为载体，构建重组质粒pET28a-tth0825，采用E.coliTransetta（DE3）作为宿主菌表达重组蛋白，经过镍柱亲和层析获得纯化蛋白，纯化后的蛋白再进行催化性质分析。结果：通过PCR方法成功获得了基因序列，并成功构建了重组质粒pET28a-tth0825，表达菌Transetta-28a-tth0825成功表达了大小约39.5kDa的蛋白。经过性质表征，半乳糖激酶Tth0825的最适温度为70℃，最适pH值为9.5，最佳金属离2+子为Mg,半乳糖激酶

6、Tth0825催化D-半乳糖反应转化率为60%左右。结论：本实验成功构建了重组质粒pET28a-tth0825，并在大肠杆菌表达体系中成功表达，经过镍柱亲和层析纯化后得到纯蛋白，半乳糖激酶表现出良好的热稳定性和催化活性。关键词：半乳糖激酶，嗜热，克隆，表达，纯化IAbstractCloning,expression,purificationandcharacterizationofathermophilicgalactosekinaseTth0825fromThermusthermophilusBackgroundandpurpos

7、e:Galactokinaseisanphosphotransferasethatfacilitatesthephosphorylationofα-D-galactosetogalactose1-phosphateattheexpenseofonemoleculeofATP.Galactokinasewasfoundinmostorganismsforthecatabolismofβ-D-galactosetoglucose1-phosphate.Firstisolatedfrommammalianliver,galactokina

8、sehasbeenstudiedextensivelyinyeast,archaeaandplants.Experimentalmethod:Thetth0825genewasamplifiedbyPCRusingtheThermus