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时间:2019-10-05
《利用佐剂性关节炎大鼠进行青藤碱贴剂药动学研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、利用佐剂性关节炎大鼠进行青藤碱贴剂的药动学研究张英丰周莉玲(广州中医药大学,广东广州510006)[摘要]目的:研究青藤碱贴剂在病理状态下的药动学规律。方法:以佐剂性关节炎大鼠为研究对象,以HPLC-UV为检测手段,测定给药以后不同时间点的血药浓度,计算药动学参数。结果:建立了专属性的血药浓度检测方法,青藤碱贴剂达峰时间约10h,MRT约24h,达峰浓度约455ng·mL-1,其体内行为属于一级速率、二室开放模型。结论:本方法灵敏、快速、正确、选择性强,较好的满足青藤碱的药动学研究,为合理用药提供参考。关键词:青藤碱贴剂;佐剂性关节炎大鼠;药动学药
2、动学是基于生物样品分析检测的基础上,通过拟合药动学参数来表征药物的体内过程,不仅可以作为剂型评价手段,亦可以作为处方筛选手段。常规的药动学多基于正常动物,但药物在病理和正常状态下模型动物的体内过程存在较大差异,故基于病理模型的药动学成为药动学研究发展方向之一[1,2]。青藤碱是具有抗炎、镇痛活性的单体,常用于治疗风湿及类风湿性关节炎,其理化性质较适合制备成透皮吸收的外用制剂,符合国内外药剂学的发展方向。本实验室在前期制备的青藤碱透皮贴剂的基础上,复制大鼠佐剂性关节炎模型,考察青藤碱贴剂对佐剂性关节炎继发病变大鼠的药动学特征,为合理用药提供借鉴。1实
3、验材料1.1试药青藤碱标准品(中国药品生物制品检验检定所,批号:0774-200105);甲醇(天津科密欧化学试剂开发中心,色谱醇);肝素钠注射液(国药准字H32020612,江苏万邦生化医药股份有限公司);氯仿及石油醚(30-60℃沸程)均为分析纯;弗氏完全佐剂(美国Sigma公司,批号:063K8928);青藤碱贴剂(实验室自制,每贴含青藤碱15mg)。1.2动物【作者】张英丰,讲师,出站博士后,研究方向:生物药剂学与药代动力学,TEL:(020)39358043,Email:zyfeng-2006@163.com;【基金资助】国家自然科学基金
4、资助项目(编号:30672669);中国博士后基金资助项目(编号:20070420509)SD大鼠,♂60只,200±20g(广州中医药大学实验动物中心提供,许可证号SCXK粤2003-001);1.3仪器戴安SummitP680型高效液相色谱仪,包括p680泵和UVD170可变波长紫外检测器,Chromeceo色谱工作站;SK-1型试管振荡混匀器(江苏医疗器械厂)。ST21索福台式高速冷冻离心机(德国索福公司);BP211D十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司);N-EVAPTM111氮吹仪(OrganomationAssoci2a
5、tes,Jnc。266RiverRoadWestBerlin,MA01503.USA);2实验方法2.1色谱条件大连依利特公司,HypersilBDSC18色谱柱(250mm×4.6mm,5µm);流动相为甲醇-水(50/50,v/v),加入0.25%的乙二胺作为改性剂;流速1mL·min-1,检测波长265nm,柱温:室温2.2方法学考察2.2.1标准曲线和质量控制样品(QC)精密称定青藤碱标准品7.50mg置于25mL容量瓶中,色谱甲醇定容,精密吸取2.5mL置于5mL容量瓶中,甲醇定容,浓度为150µg·mL-1,再精密吸取1mL于10mL容
6、量瓶中,流动相定容即得浓度为15µg·mL-1的标准品液。肝素抗凝血浆置于离心管中,分别加入标准品使浓度分别为75、150、300、750、1500、3000、6000、9000ng·mL-1,按血浆处理方法处理,进样20µL,以峰面积对浓度进行线性回归得回归方程:A=4.9503*C-0.1834(R2=0.9992)QC样品分别配制高、中、低(9000、750、150ng·mL-1)3个浓度(n=6),在方法学验证中,用以计算精密度、准确度、回收率,QC样品按“血浆样品处理”项操作。2.2.2血浆样品处理[3]大鼠腹主动脉取血,肝素抗凝(肝素用
7、量为10u·mL-1),3000r·min-110min离心,分离血浆,精密吸取血浆1mL,加入5mL的碱性氯仿-石油醚(30-60℃,1:1,v/v),涡旋混匀1min,4000r·min-15min离心,吸取氯仿层4mL,50℃水浴氮气吹干,50µL甲醇涡旋复溶,4℃15000r·min-110min高速离心即得,上清液进样20µL。2.2.3样品处理方法的专属性考察分别制备空白血浆样品、含有青藤碱标准品空白血浆预处理样品、青藤碱标准品、血浆样品分别进样,对比色谱图。2.2.4绝对回收率与方法回收率高、中、低浓度的QC血样各6份,按照上述样品处
8、理方法处理后进样,另分别配制相应浓度的青藤碱流动相溶液,不经萃取直接以等量进样作为标准,比较峰面积之比A萃取/A标准品,计
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