利用佐剂性关节炎大鼠进行青藤碱贴剂药动学研究

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1、利用佐剂性关节炎大鼠进行青藤碱贴剂的药动学研究张英丰周莉玲（广州中医药大学，广东广州510006）[摘要]目的：研究青藤碱贴剂在病理状态下的药动学规律。方法：以佐剂性关节炎大鼠为研究对象，以HPLC-UV为检测手段，测定给药以后不同时间点的血药浓度，计算药动学参数。结果：建立了专属性的血药浓度检测方法，青藤碱贴剂达峰时间约10h，MRT约24h，达峰浓度约455ng·mL-1，其体内行为属于一级速率、二室开放模型。结论：本方法灵敏、快速、正确、选择性强，较好的满足青藤碱的药动学研究，为合理用药提供参考。关键词：青藤碱贴剂；佐剂性关节炎大鼠；药动学药

2、动学是基于生物样品分析检测的基础上，通过拟合药动学参数来表征药物的体内过程，不仅可以作为剂型评价手段，亦可以作为处方筛选手段。常规的药动学多基于正常动物，但药物在病理和正常状态下模型动物的体内过程存在较大差异，故基于病理模型的药动学成为药动学研究发展方向之一[1,2]。青藤碱是具有抗炎、镇痛活性的单体，常用于治疗风湿及类风湿性关节炎，其理化性质较适合制备成透皮吸收的外用制剂，符合国内外药剂学的发展方向。本实验室在前期制备的青藤碱透皮贴剂的基础上，复制大鼠佐剂性关节炎模型，考察青藤碱贴剂对佐剂性关节炎继发病变大鼠的药动学特征，为合理用药提供借鉴。1实

3、验材料1.1试药青藤碱标准品（中国药品生物制品检验检定所，批号：0774－200105）；甲醇（天津科密欧化学试剂开发中心，色谱醇）；肝素钠注射液（国药准字H32020612，江苏万邦生化医药股份有限公司）；氯仿及石油醚（30-60℃沸程）均为分析纯；弗氏完全佐剂（美国Sigma公司，批号:063K8928）；青藤碱贴剂（实验室自制，每贴含青藤碱15mg）。1.2动物【作者】张英丰，讲师，出站博士后，研究方向：生物药剂学与药代动力学，TEL：（020）39358043，Email：zyfeng-2006@163.com；【基金资助】国家自然科学基金

4、资助项目（编号：30672669）；中国博士后基金资助项目（编号：20070420509）SD大鼠，♂60只，200±20g（广州中医药大学实验动物中心提供，许可证号SCXK粤2003-001）；1.3仪器戴安SummitP680型高效液相色谱仪,包括p680泵和UVD170可变波长紫外检测器，Chromeceo色谱工作站；SK-1型试管振荡混匀器（江苏医疗器械厂）。ST21索福台式高速冷冻离心机(德国索福公司)；BP211D十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司)；N-EVAPTM111氮吹仪(OrganomationAssoci2a

5、tes,Jnc。266RiverRoadWestBerlin，MA01503.USA)；2实验方法2.1色谱条件大连依利特公司，HypersilBDSC18色谱柱（250mm×4.6mm,5µm）；流动相为甲醇-水（50/50，v/v），加入0.25%的乙二胺作为改性剂；流速1mL·min-1，检测波长265nm，柱温：室温2.2方法学考察2.2.1标准曲线和质量控制样品（QC）精密称定青藤碱标准品7.50mg置于25mL容量瓶中，色谱甲醇定容，精密吸取2.5mL置于5mL容量瓶中，甲醇定容,浓度为150µg·mL-1,再精密吸取1mL于10mL容

6、量瓶中，流动相定容即得浓度为15µg·mL-1的标准品液。肝素抗凝血浆置于离心管中，分别加入标准品使浓度分别为75、150、300、750、1500、3000、6000、9000ng·mL-1,按血浆处理方法处理，进样20µL，以峰面积对浓度进行线性回归得回归方程：A=4.9503*C-0.1834(R2=0.9992)QC样品分别配制高、中、低(9000、750、150ng·mL-1)3个浓度(n=6)，在方法学验证中，用以计算精密度、准确度、回收率，QC样品按“血浆样品处理”项操作。2.2.2血浆样品处理[3]大鼠腹主动脉取血，肝素抗凝（肝素用

7、量为10u·mL-1），3000r·min-110min离心，分离血浆，精密吸取血浆1mL，加入5mL的碱性氯仿-石油醚（30-60℃，1:1，v/v），涡旋混匀1min，4000r·min-15min离心，吸取氯仿层4mL，50℃水浴氮气吹干，50µL甲醇涡旋复溶，4℃15000r·min-110min高速离心即得，上清液进样20µL。2.2.3样品处理方法的专属性考察分别制备空白血浆样品、含有青藤碱标准品空白血浆预处理样品、青藤碱标准品、血浆样品分别进样，对比色谱图。2.2.4绝对回收率与方法回收率高、中、低浓度的QC血样各6份，按照上述样品处

8、理方法处理后进样，另分别配制相应浓度的青藤碱流动相溶液，不经萃取直接以等量进样作为标准，比较峰面积之比A萃取/A标准品，计