青藤碱对佐剂性关节炎大鼠炎症免疫功能的影响

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1、青藤碱对佐剂性关节炎大鼠炎症免疫功能的影响作者：陈方军叶丽胡伟张荣宜程远华【摘要】【目的】观察青藤碱（SINO）对佐剂性关节炎（AA）大鼠炎症免疫功能的影响。【方法】选用SD大鼠随机分为正常组，模型组，SINO低、中、高剂量组（剂量分别为60、120、240mg/kg），雷公藤多苷（TPT）组（剂量为30mg/kg）；除正常组外，其他组均采用弗氏完全佐剂足跖皮内注射复制AA模型；各组于造模后第12天开始给药，连续12d；观察不同时间段的大鼠足趾肿胀度及关节评分；采用放射免疫法检测滑膜细胞白细胞介

2、素1β（IL1β）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的含量；观察各组大鼠滑膜细胞的超微结构；采用逆转录-聚合酶链反应检测各组滑膜细胞IL1βmRNA、TNFαmRNA的表达。【结果】各剂量组SINO均可不同程度降低大鼠足趾肿胀度和关节炎评分，抑制滑膜细胞产生IL1β、TNFα，降低滑膜细胞IL1βmRNA、TNFαmRNA的表达（P＜0.05或P＜0.01），恢复AA大鼠滑膜细胞的形态。【结论】SINO治疗类风湿性关节炎的作用可能与其能抑制滑膜细胞分泌炎性介质，恢复滑膜细胞形态有关

3、。【关键词】青藤碱/药理学；关节炎，类风湿/中药疗法；关节炎，类风湿/免疫学；滑膜细胞/超微结构；疾病模型，动物；大鼠类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是一种慢性全身性自身免疫性疾病，病理基础为关节滑膜炎，病因不明，临床表现复杂多样，严重危害了人类的身体健康。青藤碱（sinomenine，SINO）是从中药青风藤中提取的生物碱单体，具有抗炎、免疫抑制、镇痛、降压、抗心律失常等药理作用［1-2］。本研究以佐剂性关节炎（AA）大鼠为模型，观察SINO对AA大鼠滑膜细胞超微

4、结构及分泌炎性细胞因子的影响，现报道如下。1材料与方法1.1动物SD大鼠,普通级,体质量180～200g，雄性，由安徽省医学研究所实验动物中心提供，合格证号：皖医动准01号。1.2药物及试剂青藤碱（湖南正清制药厂生产，批号：0009101）；新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司提供，批号：031020）；RPMI1640粉（Sigma公司提供）；雷公藤多苷片（TPT，上海复旦复华药业有限公司生产，批号：060503）；卡介苗（BCG，卫生部上海生物制品研究所产品，批号：20060101

5、）；RPMI1640培养液（Gibco公司产品）；125IIL1β放免试剂盒购于北京北方生物研究所，其他试剂为分析纯。IL1β引物大小377bp，上游：5′TTGTGGCTGTGGACAAGCTG3′，下游：5′GCCGTCTTTCATACACAGGG3；TNFαmRNA引物大小249bp；上游：5′CTGGGCAGCGTTTATTCT3，下游：5′TTGCTTCTTCCCTGTTCC3；内参照βactin引物大小147bp，上游：5′CACCCTGTGCTGCTC

6、ACCGAGGCC3′，下游：5′CCACACAGATGACTTGCGCTCAGG3′；以上引物均由上海生工公司合成。1.3仪器JT12001型电子天平由上海精天电子仪器厂生产；YLSTA足趾容积测量仪由山东省医学科学院设备站生产；水套式CO2培养箱为美国SHELLAB产品；GL20A全自动高速冷冻离心机由湖南仪器仪表总厂离心机厂生产；YJ1450型医学净化工作台由苏州净化设备公司生产；倒置式显微镜为日本Olympus产品；J1230型透射电镜为日本电子公司产品；GC911型α放射

7、免疫计数仪由中国科学技术大学中佳公司生产。1.4分组、给药及造模SD大鼠随机均分为6组：正常组，模型组，SINO低、中、高剂量组（60、120、240mg/kg）和TPT组（30mg/kg），每组10只。按2.2SINO对AA大鼠多发性关节炎影响表2结果显示，致炎后第16天，模型组大鼠非致炎足关节开始出现红肿、变形，行走不便。SINO各剂量组均可显著抑制AA大鼠继发性关节病变（P＜0.05或P＜0.01）。表1SINO对AA大鼠继发性炎症的影响统计方法：方差分析；①P＜0.05，②P＜0.01，

8、与模型组比较表2SINO对AA大鼠多发性关节炎的影响统计方法：方差分析；①P＜0.01，与正常组比较；②P＜0.01，与模型组比较2.3SINO对滑膜细胞超微结构的影响滑膜组织中有两型滑膜细胞，A型滑膜细胞起源于巨噬细胞，B型滑膜细胞起源于成纤维细胞。正常滑膜组织以B型细胞为主，其特征是粗面内质网、游离核糖体较多；与正常组大鼠相比，AA大鼠则多见A型滑膜细胞，细胞内囊泡增多，A型细胞含明显的高尔基体和囊泡分散于细胞质内，粗面内质网少，线粒体肿胀、嵴突破坏；B型滑膜细胞数量减少。各给药组大鼠以B型