滑膜细胞凋亡在佐剂性关节炎大鼠关节炎症中的作用

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1、滑膜细胞凋亡在佐剂性关节炎大鼠关节炎症中的作用【关键词】实验性关节炎；成纤维样滑膜细胞；凋亡〔Abstract〕ObjectiveToexploretheeffectsofproliferationandapoptosisoffibroblast-likesynoviocyteonarticularinflammationinadjuvantarthritis(AA).Methods0.1mLofthepleteFreud'sadjuvant(CFA)ountofapoptoticcellsandcel

2、lsinS-phaseeasuredbyfloetry.Thecorrelationoffibroblast-likesynoviocyteapoptosisandAIetrydemonstratedtheamountofcellsinS-phaseincreasedaytakearoleinacutesynovialinflammtion.〔KeyI-1640培养基（美国Gibco公司），胰蛋白酶（美国Amreso公司），Ⅱ型胶原酶（美国Sigma公司），新生牛血清（杭州四季青公司），碘化丙啶（PI，

3、美国Sigma公司）。OLYPUSBX-60光学显微镜（日本）。流式细胞仪（美国BectonDickinson公司）。1.2试验动物与分组雌性I-1640培养液少许，使液体刚刚覆盖组织块为宜，再置37℃、5%CO2培养箱中继续培养。每隔1~2d换营养液1次，待滑膜成纤维细胞长出组织块较多后，弃除组织块，继续培养，待细胞长满后，用0.5g/L胰蛋白酶、0.2g/LEDTA消化细胞，进行传代培养，传代2次。1.5流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡消化细胞并分别收集于离心管中，以800r/min离心5min

4、。弃上清，用冷PBS洗2次，加700mL/L冷乙醇于4℃固定过夜。再以冷PBS洗2次，调整细胞数为1×106个/L。各管加入PI染液于4℃染色30min，用流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡，以联机专用软件分析结果。1.6统计学分析实验数据用x±s表示（流式细胞分析结果将阳性率转换成阳性细胞数），采用SPSS10.0软件进行组间均数ANOVA方差分析，直线相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1AA大鼠膝关节滑膜的组织学观察正常大鼠膝关节滑膜衬里层由1~2层滑膜细胞组成，且部分不连续，

5、滑膜衬里下层则为脂肪细胞，未见炎症细胞浸润、成纤维细胞及胶原纤维；实验组大鼠FCA注射后第14至49天，可见滑膜衬里层逐渐增厚，衬里层细胞由1~2层逐渐增加至10~15层，衬里下层有大量炎症细胞浸润，脂肪细胞消失，可见大量成纤维细胞及胶原纤维，部分可见纤维素样坏死，新生血管明显增多，可见血管翳形成。2.2AA大鼠不同时间点的AI和RIAA大鼠成模后，随着病程的延长，RI逐渐增加。在发病早期，AI逐渐增加，28d时达高峰，在疾病后期AI逐渐下降。（见表1）。2.3AA大鼠不同时间点关节成纤维样滑膜细胞流式

6、细胞仪细胞周期分析及凋亡检测结果见表2，流式细胞周期分析结果显示，随着疾病的发展，成纤维样滑膜细胞处于S期的细胞比例逐渐增加，处于G1的细胞比例逐渐减少（见图1）。由于细胞周期中S期细胞为增殖旺盛细胞，而G1细胞分裂增殖相对停顿，说明随着疾病的发展，成纤维样滑膜细胞增殖活跃。在发病早期，纤维样滑膜细胞凋亡细胞比例逐渐减少，35d后凋亡细胞比例逐渐增加（见图2）。对照组S期细胞及凋亡细胞比例均较低，说明正常滑膜组织细胞更新相对缓慢。2.4成纤维样滑膜细胞凋亡与AI的相关分析结果直线相关分析显示，凋亡细胞比

7、例与AI显著负相关（r=0.83，P<0.01）（见图3），即成纤维样滑膜细胞凋亡抑制，则AI增加。3讨论类风湿关节炎是以多关节受累为主要表现的自身免疫性疾病，其主要病理特征是滑膜细胞（主要为成纤维样滑膜细胞）异常增生，衬里层增厚，炎症细胞浸润（巨噬细胞、T细胞等），形成类风湿血管翳并侵蚀软骨与骨，最后导致关节破坏。RA成纤维样滑膜细胞（fibroblast-likessynoviocytes,FLS）是关节滑膜细胞中主要的一种，被公认在RA病理演变中起着非常重要作用，它可以释放多种细胞因子，并可

8、因RA关节微环境变化发生演变，呈现肿瘤样细胞的内源性活化，存在异常凋亡与增殖缺陷。不断积累的证据表明，RA滑膜细胞凋亡缺陷是RA发病及病情的一个重要病理机制[5]。因而，对RA成纤维样滑膜细胞凋亡的研究，使我们对RA发病机制及病理过程有更深一步的了解，并提示我们能够以成纤维样滑膜细胞凋亡为靶点来合理设计治疗新措施[6]，为RA的治疗开辟新的领域。然而，RA为一种慢性进展性疾病，疾病发展的不同阶段，受累关节的病理变化及关节微环境亦不断变化，关