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《人5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)酶联免疫分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)酶联免疫分析试剂盒使用说明书96T本试剂盒仅供研究使用。检测范围:15IU/L・350IU/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)水平。用纯化的人5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔屮依次加入5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),再与HRP标记的5,10亚
2、甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体结合,形成抗体■抗原■酶标抗体SZ合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(640IU/L)0.5mlX1瓶3酶标包被板
3、12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于・20°C保存,但应避免反复冻融2.不能检测含MN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。320IU/L5号标准品150)11的原倍标
4、准品加入150
5、11标准品稀释液160IU/L4号标准品150^1的5号标准品加入150卩1标准品稀释液80IU/L3号标准品150(11的4号标准品加入150
6、11标准品稀释液40IU/L2号标准品150)11的3号标准品加入150卩1标准品稀释液20IU/L1号标准品150)11的2号标准品加入150
7、11标准品稀释液1.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品1
8、0卩1(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。2.温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。3.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸帼水30倍稀释后备用4.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。5.加酶:每孔加入酶标试剂50gl,空白孔除外。6.温育:操作同3。7.洗涤:操作同5。8.显色:每孔先加入显色剂A50
9、iI,再加入显色剂B50
10、il,轻轻震荡混匀,37°C避光显色10分钟.9.终止:每孔加终止液5O
11、1
12、L终止反应(此时蓝色立转黄色)。10.测定:以空白空调零,450nm波长依序测暈各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂,样品和标准品加入准备好的样品和标准品,37°C反应30分钟洗板5次,加入酶标试剂,37°C反应30分钳i洗板5次,加入显色液A、B,37°C显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与0D值计算出标准
13、曲线的直线回归方程式,将样品的0D值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1•试剂盒从冷藏环境屮取出应在室温平衡15・30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释吋可在水浴中加温助溶,洗涤吋不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标木屮待测物质含量过高(样木0D值大于标
14、准品孔第一孔的0D值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算吋请最后乘以总稀释倍数(XnX5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8°C02.有效期:6个月