利用RNAi沉默KIAA0280后对缺氧诱导大鼠神经元凋亡的影响（医学论文）

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1、EK利用RNAi沉默KIAA0280后对缺氧诱导大鼠神经元凋亡的影响作者：黄海潮，潘雪刁，金桂芳，巫玮，潘琴，石磊,臧林泉【摘要】目的利用RNA干扰（RNAi）技术，观察脑缺血相关新蛋白KIAA0280被特异性沉默后对正常神经元和缺氧诱导神经元凋亡的影响。方法取新生大鼠培养至5~7d的神经元，经由密闭容器引起缺氧诱导神经元凋亡模型。采用RNAi技术封闭KIAA0280的表达，观察该基因被封闭后对正常神经元的生长以及缺氧诱导神经元凋亡的作用和影响。结果脂质体转染KIAA0280基因特异性siRNA12、24h后对正常细胞生长具有一定的

2、影响；在此基础上缺氧4、8h,发现RNAi组的神经元对缺氧诱导的神经元凋亡比对照组对缺氧更加敏感，更易受损伤。结论KIAA0280对正常神经元具有一定的作用，并且对缺氧诱导凋亡神经元具有一定的保护作用。【关键词】KIAA0280;RNAi;缺氧；神经元；凋亡Abstract:ObjectiveToobservetheeffectonnormalneuronandapoptosisneuronsinducedbyhypoxiaafterblockingtheKIAA0280byRNAitechnique.MethodsPrimaryn

3、euronsofratsculturedfor5〜7dwereputtoairtightcontainertoinduceneuronhypoxiaandestablishthemodelofneuronalapoptosis・AfterblockingtheKIAA0280byRNAitechnique,theeffectsonthenormalneuronandneuronalapoptosisinducedbyhypoxiawereobserved.ResultTransfectingthespecificsiRNAforKI

4、AA0280toneuronwithliposomefor12h,24h,theimpactsonthenormalneuronsbythesiRNAwereobserved・Then,theneuronswereputinhypoxiaenvironmentfor4hand8h;itisfoundthat,comparedwithsimplehypoxicgroup,theRNAigroupwasmoresensitiveandliabletobeinjuredduringapoptosisinducedbyhypoxia・Con

5、clusionApplicationoftheRNAitosilenceKIAA0280hadcertainimpactsonthenormalneuronsandcouldpromoteapoptosisanddeathinthehypoxic-inducedneuronapoptosis・ItwasindicatedthatKIAA0280hadeffectsonthenormalneurons,andplayedaroleinprotectinghypoxia-inducedapoptosisneurons・Keywords:

6、KIAA0280;RNAi;hypoxia;neuronapoptosis缺血缺氧脑中风的病理表现为脑缺血缺氧引起神经元凋亡、坏死，进而引起脑组织的坏死。在缺氧的早期，机体会作出应激反应，主动地产生神经保护作用，使机体免受更大的伤害，使机体能耐受一定程度的缺血缺氧损伤，这种现象被称作缺血预处理（缺血预适应）[l]o脑缺血相关新蛋白KIAA0280是臧林泉等[2]人应用该缺血理论，采用mRNA荧光差异显示技术（mRNAfluorescencedifferentialdisplay）研究缺血时神经元在此应激条件下基因差异的表达，从中筛选

7、出差异表达明显的基因（上调/下调基因），以明确防治脑缺血、缺氧相关疾病（心肌、器官移植、肿瘤等）的一个或者多个新靶点。前期工作利用MCAO造成大鼠缺血缺氧动物模型，免疫组织化学和Westernblot等均证实，KIAA0280在缺血缺氧组织中出现过高表达[3],表明其与缺血缺氧所致的细胞凋亡、死亡密切相关。但是，对于其在脑组织缺血缺氧中的具体作用，目前国内外尚未见报道。本实验采用RNAi技术沉默KIAA0280的表达，以明确KIAA0280在缺氧缺血引起的神经元凋亡中的作用，为阐明脑中风、心衰、心肌梗死等与细胞凋亡相关疾病的发病机制

8、奠定理论基础。1材料和仪器1.1动物SPF级SD大鼠，雌性，体质量180〜250g,由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2003-0002,粤监证字2007A006。1.2主要试剂DMEM高糖培养基、胰蛋白酶、优级胎