肝硬化动物模型构建的研究进展

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1、维普资讯http://www.cqvip.com266JSurgConceptsPract2008，Vo1．13，No．3·综述·肝硬化动物模型构建的研究进展张贵阳综述杨卫平，陈皓审校(上海交通大学医学院附属瑞金医院外科，上海200025)关键词：肝硬化；动物模型；研究设计中图分类号：R657-31文献识别码：A文章编号：1007．9610(2008)03．0266—04各种原因引起的肝硬化门静脉高压症是威胁人类健康化病理发展机制研究中的应用。的重要疾病之一．目前对此类疾病的研究及相关药学实验二、化学致癌物诱导性肝硬化模型主要建立在肝硬化动物模型(cirrhosismode

2、l。CM)基础上，低剂量长期应用某些致癌物如二甲基亚硝胺(DMNA)、因此构建一种稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝硬化动物硫代乙酰胺(TAA)等可诱导实验动物肝硬化和肝癌的发生。模型是研究的必要条件。当前主要有两大类CM建模方案：DMNA是一种具有肝毒性、细胞毒性和免疫毒性的化学物单因素诱导建模及复合多因素诱导建模，然而由于模型与质．其进入机体后通过活性代谢产物可导致体内核苷酸、氨病人在病因、病程和转归上的差异．CM的构建尚需进一步基酸残基等重要的生命物质发生甲基化反应，细胞外基质完善和改良。本文以啮齿类动物为主要实验研究对象，对近进行性增加。促进肝细胞坏死或凋亡，最终引起

3、肝纤维化和年肝硬化动物模型构建的研究进展加以综述。肝硬化发生。Kitarnura等曾对大鼠进行DMNA诱导实验，按照10mg／kg体重剂量．给予I％DMNA生理盐水稀释液腹单因素诱导性肝硬化模型腔注射，每周2次，维持4—8周，肝小叶可出现炎性细胞浸润和出血性坏死病变．且在肝内形成“中心．中心纤维间隔”一、四氯化碳(CCl~诱导性肝硬化模型或“中心．门静脉性纤维间隔”。CCL是最常用于CM诱导的化学物质，CCL进入机体TAA是一种强效肝细胞毒素．短期大剂量应用可导致后，首先经肝细胞微粒体细胞色素P450激活生成活性三氯肝小叶中心急性坏死．长期慢性作用于机体可促使胆管增甲基(C

4、C1一)，CC1一通过攻击肝细胞膜的磷脂引起脂质过氧生及肝硬化发生，且在组织学上TAA所诱导的肝硬化与病化从而破坏膜性结构，CC1一还可与蛋白质共价结合，损害线毒性诱发的肝硬化很相似TAA进入机体后首先在肝细胞粒体导致还原性辅酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝内内微粒体单加氧酶、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)及细胞色素P450生成减少，进而抑制脂肪酸氧化和三羧酸循环。此外，由于作用下转化成乙酰胺及TAA．S．oxide，后者进而转化为两种内质网受损可导致脂蛋白合成障碍，使三酰甘油和脂肪酸不稳定的活性代谢物化合物TAA．S和S-dioxide，它们通过在肝细胞内蓄积，形成

5、脂肪变性。因此，低浓度的CC1反复共价结合肝内大分子导致肝细胞变性、坏死。TAA的建模效应用，可使大鼠的肝组织受到损害．修复．损害的循环破坏作果较好，Constantinou等161在大鼠饮用水中加入TAA(300rag／L)用．最终导致肝纤维化及肝硬化的发生Il1。持续诱导3个月后可在大鼠肝内形成大量纤维间隔，硬化目前．CCL诱导制备CM的主要途径包括皮下注射、腹病变明显可见。腔注射和口服灌胃等。通常多采用30％一60％CC1油剂皮下化学致癌物诱发的CM效果较稳定，但由于DMNA、注射的方法，剂量因动物种类而不同，一般小鼠为1—3ml／kgTAA等化学致癌物毒性大、易挥发

6、，且动物排泄物在24h内(体重)，大鼠为3—5ml／kg，每周2次，通常12—15周即可成仍含毒性，所以制作CM时需采取严格的隔离措施。目前这模。该方法虽操作简便，但CCL经皮下注射很快即被机体吸类模型除用于肝硬化门静脉高压症研究之外，还广泛用于收进入循环系统，脑、肾毒性较大，注射位置易发生浸润性肝硬化向肝癌转化机制的研究17]。脓肿和溃疡．死亡率可高达30％一40％。CCL腹腔内注射时，三、酒精性肝硬化模型(alcoholiccirhosismodel。ACM1经门静脉系统吸收的浓度较皮下注射高．使肝硬化形成时肝脏是酒精在机体内代谢的主要场所，通常慢性酒精间短，而较少的毒

7、副反应使死亡率降至20％一35％tz~。CC1灌中毒可引起肝脏的4种序贯性损伤，即脂肪肝、酒精性肝胃的吸收和代谢途径类似于腹腔注射。经门静脉系统进入肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。研究发现酒精在肝内实质，其刺激较少和生理模拟性更佳，用中等剂量(0．8gag)代谢过程中。肝细胞内NADH／NAD+比率增高、自由基大量CCL制备小鼠CM时．灌胃诱导的速度优于腹腔注射，且二产生、活性氧簇系统高度活化、脂质过氧化及脂肪积蓄，这者在生存曲线上并无特异差别。总之，CCL诱导CM时，机制些生化改变可引起肝细胞的脂肪变性、坏死