肝硬化动物模型的研究进展

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1、肝硬化动物模型的研究进展：陈学新,潘华,郑月梅,熊利泽【关键词】肝硬化动物模型;麻醉药;肝脏大部分麻醉药在肝脏代谢，肝硬化对麻醉药及手术后苏醒影响较大，建立一个类似于人类肝硬化的动物模型是深入研究与肝硬化有关课题不可缺少的环节。理想的肝硬化模型应具有人类肝硬化的基本形态特征，其病理改变呈阶段性进展，且造模方法简单，模型形成率高，重现性好，动物死亡率低等特点。肝硬化因其病因的多样性、动物和人的种属差异等，迄今理想肝硬化动物模型的建立仍是临床研究和实验研究中的一个难点，理想模型制作尚未完全取得成功。病毒性肝硬化模型，特别是人乙肝病毒感染的动物模型，理应成为最理想的肝硬化动物模

2、型。然而，由于人乙肝病毒只能感染人和少数灵长类动物，所以长期以来，缺乏实际可用的动物模型，现在以化学和复合等因素制备的肝硬化模型多见。国内外学者进行了大量的动物实验，建立了一些比较成熟的肝硬化动物模型。由于每种模型的致病因素不同，产生肝硬化的具体机制、稳定性、重复性以及与人患病过程相似程度等也都不尽相同。本文就近年来肝硬化动物模型的研究进展作一综述。　　1以CCl4为主诱导的肝硬化模型　　1936年Cameron等[1]首次报道应用CCl4制作肝硬化动物模型，此后，CCl4广泛应用于动物实验中。CCl4是一种化学毒物，它反复作用于肝脏引起急、慢性肝脏损害，对肝脏损害有量效

3、关系。肝脏损害与CCl4被肝微粒体内依赖于Cyt.P450的混合功能酶的激活，产生自由基CCl3及Cl-1有关，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，使肝细胞损伤[2],此外，二者均可导致微粒体钙泵活性降低，使胞质Ca2+升高，细胞内Ca2+稳态遭到破坏，从而引起细胞代谢紊乱甚至死亡[3]。坏死物质及其继发的炎性细胞浸润产生肝纤维化刺激因子，后者促进贮脂细胞——成纤维细胞增生，产生大量胶原纤维形成肝纤维化[4]。一般采用40%～50%CCl4油溶液，经口服、腹腔注射、皮下注射造模，造模时间依给药途经和剂量不同，2～4个月不等，一般在8～12周可完全肝硬化，所用动物包括

4、大鼠、小鼠、家兔、犬、猴等。该模型在实验早期即可见明显的肝细胞损伤和炎症反应，在实验第6～9周时即可见明显的纤维组织增生。用CCl4攻击建立的肝纤维化模型，具有简便、易行、价廉且耗时短的特点，在形态学、病理生理学的某些方面与人肝硬化相似。　　Krahenbuhl等[5]分别给鼠口服CCl4辅以苯巴比妥为唯一饮用水的方法建立肝纤维化动物模型，苯巴比妥的浓度分别采用0.05mg/mL和35mg/dL，其作用为诱导肝酶的活性，增加肝组织对CCl4的敏感性。Krahenbuhl制备模型时CCl4的首次用量为0.05mL/kg，以后每周2次，每次用量以前次用量引起体重变化减少6%～

5、9%为指标来决定，第5周时用量为(220±20)μL/只，第10周为(220±40)μL/只，其建模时间10周时，结果显示肝脏表面可见结节形成，实质变致密，镜检可见在结节周围有少量纤维组织沉积，同时伴有脾大、慢性门脉高压表现。　　皮下注射吸收过快入全身循环系统，脑肾毒性大，注射位置易发生浸润性脓肿和溃疡，故死亡率可高达30%～40%，降低CCl4浓度可降低死亡率，但马学惠[6]采用20%的CCl4死亡率为11%。也可以用腹腔注射、灌胃、蒸汽吸入或拌于食物中快速口服的方法。腹腔内注射门静脉浓度高，肝硬化形成时间短，但死亡率较高(20%～35%)[7];灌胃法CCl4亦可直接

6、吸收入肝，但操作复杂，肠道反应大;蒸汽吸入需快速吸入，呼吸道刺激大，动物不耐受，中枢毒性大，易污染环境和伤害实验人员[6]。溶于少许食物快速口服，少吃多餐，挥发减少，浓度低胃肠刺激减小，但受动物食欲影响，剂量难掌握，实验终点不明确，周期长。　　添加苯巴比妥可缩短造模时间，8～10周可形成肝硬化，但死亡率高达40%。原理为苯巴比妥诱导肝内混合功能氧化酶，增加细胞色素P450活性，加速CCl4向-CCl3转化从而增加CCl4肝毒性[8]。　　添加乙醇能诱导P450活性从而增加CCl4的肝毒性，在乙醇的致肝脂肪变作用下使用CCl4能加速肝细胞坏死，造模时间明显缩短，同时可减小两

7、者剂量以降低药物副反应与动物的不耐受现象。吴孟超[9]报道在小鼠使用该方法60d即可致成肝硬化，肝硬化稳定，分期明显，动物死亡率低。　　但CCl4为主诱导的肝硬化模型缺点是死亡率较高，停止造模给药后，有一定自然恢复趋势的缺点。　　2CCl4、乙醇复合高脂肪饮食为主诱导的肝硬化模型　　此为多因素导致动物肝硬化，是目前较为常用的方法，此可节约时间、成功率高与死亡率低。韩得五[10]等最早采用复合因素制作大鼠CM。采用高脂低蛋白食物，30%酒精为唯一饮料，皮下注射CCl4(第1次用5mL/kg，以后每隔3d皮下注射40%CCl4油剂