小型动物实验性肝纤维及肝硬化动物模型的研究进展

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1、小型动物实验性肝纤维及肝硬化动物模型的研究进展肝纤维化是由于慢性肝病所致的持续或反复的肝实质炎症坏死而引起纤维结缔组织大量增生，其降解失衡导致肝内过多胶原沉积形成肝纤维化，肝纤维化为肝硬化早期阶段。因此，慢性肝损伤动物模型的制备具有重要的研究意义。肝纤维化的防治是国内外研究的热点，国内外对该模型的研究较多，为此笔者对几种常用的肝纤维化模型复制方法、机制及该模型的优缺点加以综述。1化学性肝损伤动物模型四氯化碳中毒模型是国内外最广泛应用的肝纤维化和肝损伤模型。将其溶于橄榄油、花生油等油溶液中，用浓度40%CCl4，按2mL/kg体重给予大鼠腹腔注射，2次/w，共8

2、w～4个月不等。单纯CCl4，一般采用30%～60%CCl4油剂皮下注射，剂量因动物种类而不同。小鼠采用1～3ml/kg体重，2次/w，肝硬化可在12～15w形成。该实验病理学改变8w出现早期纤维化症状，12w时肝小叶结构破坏，间质纤维组织增生，有明显肝纤维化症状明显增多，9出现由再生肝细胞形成的假小叶。赵秋等[1]采用20%的CCl4死亡率为11%。可以使用多种方式，灌胃、腹腔注射、蒸汽吸入或拌于食物中口服等。吕明德等[2]采用饮食控制下，腹腔注射CCl4的方法制备犬肝硬变模型，也有较满意的效果。灌胃法优点在CCl4直接经门静脉到达肝脏，肝内最高水平1.5h

3、后可达到，这种方式采用的较多。皮下注射CCl4形成时间较慢，不如灌胃法好，灌胃的缺点仍然是死亡率较高，有的高达到52.9%。许建明等[3]也采用CCl4和花生油混合液皮下注射，诱发小鼠肝纤维化模型，对不同期肝组织病理变化分析和肝脏生化指标的分析。结果发现，随造模时间延长，肝纤维化程度有逐渐增加的趋势。至造模后期，模型组动物的血清白蛋白比例明显下降，可能系肝纤维化进行发展的后果，亦说明该模型后期可导致肝功能失代偿。1.2二甲基亚硝胺致大鼠肝纤维化模型二甲基亚硝胺（DMNA）是利用它所具有的肝毒性、基因毒性和免疫毒性，在动物体内的主要代谢为一种高反应活性化合物乙醛

4、，可与体内生物大分子反应，破坏这些大分子的完整结构。低剂量长期应用可诱发肝肿瘤，大剂量可引起肝坏死和纤维化，常用二甲基亚硝胺，进入肝细胞经微粒体代谢生成乙醛损害肝细胞，同时产生活化的甲基，核酸与蛋白质甲基化致肝细胞坏死。大鼠按10mg/kg体重给予10g/L二甲基亚硝胺生理盐水稀释液，腹腔注射共10次。用药8w大鼠可引起肝纤维化。该模型可用于研究肝硬化向肝癌转化机理。但由于是致癌物，实验中慎用，同时这一模型死亡率较高。1.3硫代乙酰胺（thioacetamide，TAA）9TAA具有直接肝毒性作用，长期给药可引起肝细胞的变性坏死甚至癌变。TAA常用于制作急性肝

5、损伤、肝纤维化和肝性脑病模型。王春妍等采用皮下注射TAA600mg/kg制作大鼠急性肝损伤动物模型[4]。TAA可作用在肝细胞DNA、RNA和蛋白合成酶上产生毒性作用，还可诱肝的代谢紊乱，而致肝坏死王鹤桦等[5]用5%硫代乙酰胺（生理盐水配制，过滤除菌）皮下注射，2次/w，共12w，诱导肝纤维化。此模型具有良好的可行性和重复性、肝纤维化组织接近人类，制备成功率高等优点，常用于制作肝纤维化和急性肝功能衰竭模型。1.4D-氨基半乳糖（D-galactosamine，D-Galn）半乳糖胺致肝损伤的机制主要是干扰核酸及蛋白质的合成，造成内毒素血症，产生氧自由基及脂质

6、过氧化导致膜机能障碍，损伤线粒体致氧化磷酸化受损，最终导致细胞死亡[6]。此外，D-GalN也可通过破坏细胞内钙稳态而起作用。给药方式有皮下、腹腔内和静脉注射。病理学特点是似小结节性，结节为再生肝细胞团，由结缔组织包围，为多层网状纤维，可见胶原及弹性纤维。此种模型的症状、生化、组织学表现接近于人，重复性好，对肝纤维化、肝癌、肝衰竭、肝性脑病等研究有重要价值。但此法因D-GalN价格较高而使其应用受到限制。2免疫性肝损伤动物模型2.1腹腔注射异种血清9早在60年代就证明了免疫反应能引起肝损伤，异种动物血清或异体蛋白反复注入动物体内后，刺激动物形成过量的免疫复合物

7、，抗原可用猪、牛、马血清、猪白蛋白、血清球蛋白，人γ球蛋白等反复注射，5w引起肝纤维化，10w引起肝硬化。国内王宝恩等[7]于1989年创立了良好的免疫性肝硬化模型，采用不同方法通过人血清白蛋白来制备鼠肝纤维化模型。该模型在发病机理上归属免疫损伤，与人类慢性肝炎所致的肝纤维化较相似，因此适合免疫方面肝纤维化发病机制的研究，但仍与人类病毒性肝炎免疫损伤所致的肝硬化有差距，因其没有病毒持续复制及肝实质持续损伤过程。2.2通过腹部皮肤感染血吸虫法动物如兔、小鼠感染血吸虫后所致肝纤维化与人类肝纤维化较为接近。通过腹部皮肤使动物感染血吸虫尾蚴，特别是小鼠被认为是研究纤维

8、化因子剌激下胶原代谢等问题的最好模型。