大豆查尔酮异构酶GmCHI4A和GmCHI4B基因的克隆及功能验证

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1、：Ｓ５６５１１０１８分类号．单位代码：３研究生学号：２０１５８６２００７密级：公开吉林大学硕士学位论文学术学位（）大豆查尔酮异构酶ＧｍＯＺＣＨＩ４Ａ和ＧｍＣＨＩ４ＢＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｈａｌｃｏｎｅＩｓｏｍｅｒａｓｅＧｅｎｅＧｍＣＨＩ４ＡａｎｄＧｍＣＨＩ４ＢｉｎＳｏｙｂｅａｎ作者姓名：何则铭专业：作物学研究方向：作物分子育种指导教师：王英副教授培养单位：植物科学学院２０１８年６月大豆查尔酮异构酶GmCHI4A和

2、GmCHI4B基因的克隆及功能验证CloningandFunctionalVerificationofChalconeIsomeraseGeneGmCHI4AandGmCHI4BinSoybean作者姓名：何则铭专业名称：作物指导教师：王英副教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年5月29日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律

3、责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月６曰６中文摘要大豆查尔酮异构酶GmCHI4A和GmCHI4B基因的克隆及功能验证大豆是我国重要的经济作物，其不仅具有丰富的蛋白质和油脂，还富含维生素，异黄酮等有益身体

4、健康的微量物质，具有极高的营养价值和经济价值。然而，干旱、病害、低温、土地盐碱化等不良环境因素可严重影响大豆的正常生长发育，进而影响产量。研究表明，CHI查尔酮异构酶在植物应对生物非生物胁迫，提高植物抗逆性中起着重要作用。本实验以大豆Williams82为材料，克隆了查尔酮异构酶基因GmCHI4A和GmCHI4B，并对其进行功能验证，主要研究结果如下：1.利用RT-PCR方法从大豆品种Williams82中克隆了GmCHI4A和GmCHI4B基因。GmCHI4A和GmCHI4B的ORF全长均为630bp，编码209个氨基酸残基，预测相对

5、分子质量分别为23.5KDa和25.56KDa。预测编码的蛋白定位于细胞核中。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明，GmCHI4A和GmCHI4B基因属于IV型查尔酮异构酶基因。2.SDS-PAGE电泳检测到GmCHI4A和GmCHI4B基因均可在原核系统中高效表达。3.利用荧光定量PCR技术对GmCHI4A和GmCHI4B基因表达进行了分析，结果表明，GmCHI4A和GmCHI4B在大豆根、茎、叶、胚都有表达，不具有组织特异性，且二者均在根部表达量最高。4.利用发根农杆菌将GmCHI4A和GmCHI4B转化到大豆子叶节中，诱导产生发状根

6、，对转基因大豆发状根进行NaCl盐胁（浓度）迫处理，鉴定GmCHI4A和GmCHI4B的抗盐性。结果表明，与对照相比，转GmCHI4A和GmCHI4B的大豆发状根的耐盐性均显著提高，说明GmCHI4A和GmCHI4B能提高转基因大豆根系的耐盐性。5.转GmCHI4A和GmCHI4B基因的大豆发状根中，GmTIP1:1，GmSOD1，GmSOS1的表达量显著上升，GmTIP1:3，GmCAT1，GmPOD的表达量下降。I6.与对照相比，转GmCHI4A和GmCHI4B基因的大豆发状根中，异黄酮总量含量有所增加。关键字：大豆；发根农杆菌；功

7、能鉴定；抗盐性；CHI查尔酮异构酶IIAbstractCloningandFunctionalVerificationofChalconeIsomeraseGeneGmCHI4AandGmCHI4BinSoybeanSoybeanisanimportantcashcropinChina.Itisnotonlyrichinproteinandoil,butalsorichinvitamins,isoflavonesandothertracesubstancesthataregoodforhealth.Ithashighnutritiona

8、lvalueandeconomicvalue.However,drought,disease,lowtemperature,landsalinizationandotheradverseenvironmen