大豆查尔酮还原酶基因CHR1的功能研究-论文.pdf

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1、选Hereditas(Beijing)2014吴年7,曲EJ，36(7)：707-712WWW．chinagene．cn研究报告1楠l静，，王夏丕海大豆查尔酮还。原武酶丰基因CHR1的功能研究，李l丹，1．吉林农业大学农学院，长春130118；代2．通化市农业科学研究院，梅河口135000力1强摘要：为了验证查尔酮还原酶基，因CHR1在大豆苷元合成中的作用，文章克隆了CHR1基因并构建了RNA干扰表达载体pCPB．CHR1．RNAi，将载体转化受体大豆品种“吉农28”中，以期抑制CHR1基因的转录。通过农郑杆菌介导的遗传转化和

2、PCR检测得到4株T0代阳性植株，13株Tl代阳性植株。Southernblotting结果表明，功戍能元件以单拷贝的形式整合到大豆的基因组中。利用实时荧光定量PCR法(Quantitativerea1．timePCR，qRT-PCR)l忠，测定CHR1基因在mRNA水平上的表达量，结果表明，转基因大豆植株中CHR1的表达量与未转化的受体大豆相比降低了6O％～99％；高效液冉相色谱法(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测到合成大豆苷元过程中的前体物质异甘草素的含量1实降低了38

3、．7％。该RNA干扰机制在转录水平上抑制了CHR1基因的表达。，关键词：大豆；查尔酮还原酶CHR1；大豆苷元；RNA干扰载体才l源，FunctionofchalconereductasegeneCHR1insoybean张NanWu，PiwuWang，DanLi，LiqiangDai，ChengzhongZheng，ShiLu，YuanCai，ZhuoZhang，JingQu，HaifengXia’I．CollegeofAgriculture，JilinAgriculturalUniversity，Changchun13011

4、8，China2．TonghuaAcademyofAgriculturalSciences，Meihekou，Jilin135000，ChinaAbstract：Toverifythefunctionofchalconereductasegene(CHR1)insoybeanDaidzeinsynthesis，CHR1geneinsoy-beanwascloned，andallRNAiexpressionvectorpCPB-CHR1-RNAiwasconstructed．FourtransformedplantsinToge

5、ner-ationandthi~eentransformedplantsinT1generationofsoybean‘‘Jinong28”wereobtainedbyagrobacterium-mediatedgenetictransformation，inwhichtranscriptionsofCHR1geneweredepressed．SouthernbloaingshowedthefunctionalfragmentofpCPB-CHR1·-RNAiwasintegratedintothegenomeofrecipi

6、entsoybeanintheformofasinglecopy~DetectionofthetranscriptionofCHR1geneusingquantitativereal—timePCR(qRT-PCR)showedthattheexpressionofCHRIgeneintransformedplantsdecreased60％-99％comparedtotherecipientsoybean，whilethecontentofisoliquiritigenin，thepre一收稿日期：2014—01—07；修回

7、日期：2014—05—20基金项目：国家自然科学基金项目(编号：31171568)资助作者简介：吴楠，在读硕士研究生，专业方向：生物技术与作物遗传育种。E-mai1：525762426@qq．corn通讯作者：王丕武，教授，博士生导师，研究方向：生物技术与作物遗传育种。E．mail：peiwuw@163．cornDoI：lO．3724／SP．J．1005．2014．0707网络出版时间：2014．5．2216：30：56URL：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．1913．R．20140524

8、．2222．004．html708连Hereditas(Beijing)2014第36卷cursorsofdaidzein．decreased38．7％．TheseresultsindicatethatRNAinterferencecansuppressthetranscri