食品微生物补充

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1、3•混合酸发酵微生物将匍萄糊转变成琥珀酸、乳酸、甲酸、乙酸、氢气、二氧化碳等多种产物的生物学过程。•甲基红试验（M・R・反应）将细菌接种至葡萄糖蛋白腺水培养基屮，置37°C培养48小时，然后沿管壁加入甲基红指示剂，呈红色者为阳性，不呈红色者为阴性。•MR反应的结果：大肠杆菌为阳性，产气杆菌为阴性4•丁二醇发酵微生物发酵葡萄糖得到大量的丁二醇M少量的乳酸、乙酸、二氧化碳、氢气等产物的代谢过程。•Voges-Proskauer试验（V.P反应）将细菌接种至葡萄糖蛋口腺水培养基中，于37°C培养24小时，加入

2、与培养基等量的VP试剂，置37°C保温30分钟，呈红色者为阳性，不呈红色者为阴性。•VP反应结果产气杆菌为阳性，大肠杆菌的为阴性能源化合物的生物氧化•生物氧化的形式：某物质与氧结合、脱氢、失去电子•生物氧化的过程：脱氢（或电子），递氢（或电子），受氢（或电子）•生物氧化的功能：产能（ATP）、产还原力［H］、产小分了屮间代谢物•生物氧化的类型：有氧呼吸、无氧呼吸、发酵筛选突变株屮常用的几种结构类似物积累的物质结构类似物Arg刀豆氨酸Phe对■氛苯丙氨酸、嗡恩基丙氨酸Trp5■甲基色氨酸、6-甲基色氨酸V

3、aia-氨基丁酸盐HeVaiMeta-氨基・4■乙硫基丁酸腺喋吟2,6■二氨基嚓吟尿喘噪5■氟尿嚓吟1、应用营养缺陷型突变株条件控制细胞膜的透性••…代谢控制育种例：C.glutamicum的谷氨酸发酵，细胞膜对产物的通透性不好，从而影响产物的分泌和积累。•生物素缺陷型突变株（VH-）:添加亚适量的生物素：减弱脂肪酸的合成，提高膜的透性•汕酸缺陷型突变株：限量添加汕酸可提高膜的对谷氨酸的透性2、控制细胞壁的生物合成，提高细胞对目的产物的透性•…代谢控制发酵•例：谷氨酸发酵中添加亚致死量的青霉素：部分抑制

4、肽聚糖的合成，造成细胞壁的不完全合成，使细胞对谷氨酸的透性加人。•限量添加只对生长态细胞有效如：生物素，油酸，青霉素等从自然界中分离筛选菌种的一般步骤设计方案一采样〜增殖培养*一平板分离一筛选（初筛、复筛）〜单株纯种分离-性能考察（生产性能试验、毒性试验、菌种鉴定）一、采样从自然界种采集含目的菌的样品1.环境条件对土样本中微生物分布的影响•营养环境•水分•温度•通风•酸碱度2•采样方法（1）去除表层土（2）取545cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或逆料袋中3・注意•记录：时间，地点，环境情况等•样品袋应

5、封好口，防止水分失去•土样应在分离前破碎•尽快分离二.增殖培养（富集培养）•适用：样品中目的菌数量不够多时•目的：提高样品中目的菌的数量和比例•原理：通过控制营养成分或培养条件，使目的菌得以繁殖和/或非目的菌的生长受到抑制1、增殖培养的方法-控制营养成分■控制培养基pH■控制培养温度•热处理——增殖芽胞细菌■添加抑制剂二.纯种分离-目的：将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养1.纯种分离的一般方法（1）稀释平板法倾注平板或涂布平板（2）划线法（3）组织分离法*适用于分离高等真菌及植物病原菌定性或半

6、定量2、平皿反应快速检岀法■纸片培养显色法■透明圈法■变色圈法■生长圈法抑制3、厌氧性微生物的分离法（1）去除培养基中的溶解氧，降低Eh（2）创造无氧环境物理除氧空气置换法：干燥器或厌氧培养罐化学除氧H2+O2-H2O（耙作催化剂）>GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学反应产生H2和CO2,H2与02反应生成水（3）厌氧分离（培养）技术•高层琼脂柱技术■厌氧罐技术■厌氧手套箱技术四、筛选•初筛、复筛:五、培养工艺条件试验与生产试验1、摇瓶发酵条件培养基组成、初始pH、通风量（装液量）、接种

7、量、培养温度…2、小型台式发酵罐发酵工艺条件溶解氧控制，pH值控制，原料添加模式，消泡剂…一、诱变育种的一般步骤出发菌株I纯化、活化、同步培养培养液I离心收集细胞、洗涤，制备均一的菌悬液（玻璃株打散、过滤）单细胞或单砲子悬液!活菌计数，诱变预备试验诱变处理（活细胞计数，致死率计算中间培养（后培养）平板分离I变异率计算初筛f复筛f保藏及扩大试验一）出发菌株的选择1.出发菌株的类型2.对诱变剂的敏感性1.具有特定生产性状的可能性：2.要尽量选择单倍体，单核细胞（抱子）（二）菌悬液的制备1.细胞的生长状态2.

8、菌悬液的均一性：3.菌悬液细胞浓度＞酵母、霉菌砲子：106~107个/ml细菌、放线菌砲子：108个/m】4.菌悬液介质：三）诱变处理1・诱变剂的选择＞对于低产或野生菌，uv线往往是首选，烷化剂等也是常用的诱变剂；对于经多次诱变处理的菌株，常需要强辐射进行处理。＞碱基置换易回复，染色体畸变、移码等不易回复＞细胞的透性和生理状态＞经常变换诱变剂或复合处理2•剂量选择＞最适剂量因诱变剂的类型、出发菌株及其生理状态的不同而不同。亚硝基恥在低死亡率