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1、001963J.ShanxiAgric.Univ.学报文章编号:1671-8151(2005)01-0064-04PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA123常泓,南庆贤,岳文斌(1.山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801;2.中国农业大学食品学院,北京100094;3.山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801)摘要:钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白,可以促进钙激活酶活性的发挥,从而促进肉的嫩化。采用PCR技术,以山羊肝脏cDNA为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(calpainactivator)基因,并进行了序列测定。该片段长1017
2、bp,5′—端非翻译区长39bp,3′—端非翻译区长567bp。编码区长411bp,编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量为14298Da。与EdonMelloni等(1998)报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现,二者仅有五个位点不同。关键词:钙激活酶激活蛋白;cDNA文库;聚合酶链式反应中图分类号:S81文献标识码:AAmplificationofCalpainActivatorcDNAusingPCRCHANGHongeta.l(CollegeofLifeScience,ShanxiAgriculturalUn
3、iversity,TaiguShanxi030801,China)Abstract:ThecDNAofcalpainactivator,aproteinthatcanactivatecalpain,wasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)withtemplateofcDNAofgoatliver.Theamplifiedfragmentwasclonedandsequenced.ThecDNA,consistingof1017bp,hada5′untranslatedregionof39bpand3′untr
4、anslatedregionof567bp.Thecodingregionwas411bpinsizeandencodedapeptideof137aminoacidresidueswithatheoreticalmolecularmassof14298Da.ComparingwiththeresultofEdonMelloniet.al(1998),therewerefivedifferentsiteofaminoacid.Keywords:Calpainactivator;cDNAlibrary;PCR最新的研究表明,钙激活酶激活蛋白(cal2嫩度
5、是畜牧业和食品工业面临的一个很重要的问[1]painactivator)是钙激活酶(calpainEC题。但是,活体组织中钙激活酶是如何被激活的314122117)活性的主要调节者,对活体组织中钙一直是个迷,如何激活钙激活酶而促进肉嫩化更[7]激活酶活性的发挥起着主要的激活作用。钙激活无法实现。近年来,许多科学家分析,在钙激酶激活蛋白是钙激活酶系统中除钙激活酶抑制蛋活酶系统中存在一个钙激活酶活性的直接调节者,[2]2+白(calpastatin)外的另一个调节者,钙激活酶它可以增强钙激活酶在生理条件下对Ca的亲和2+2+激活蛋白是钙激活酶系统的一个新成
6、员。性,促进Ca与钙激活酶在Ca结合位点结合,2+钙激活酶系统是高度可调的、依赖于Ca的从而促进钙激活酶活性的发挥。[2～5]蛋白质水解酶系统,参与细胞内一系列变化。首次发现钙激活酶激活蛋白的是美国Texas在活体肌肉组织中,钙激活酶是导致肌纤维蛋白健康科学中心大学生理和药理系DeMartino等[2,4][1][8～10]降解的主要因素。试验研究还表明,钙激活人。1998年以来,意大利热那瓦大学生化酶同样是宰后肌肉成熟过程中肌原纤维降解的主研究所的Pontremoli和Melloni等人对钙激活酶激要因素,直接关系到肉的嫩化程度,而嫩度是影活蛋白的研
7、究较多。目前已知其氨基酸序列和[6]响肉品质的关键因素。促进肉嫩化,提高肉的cDNA序列。钙激活酶激活蛋白是一个分子量为收稿日期:2004-04-20修回日期:2004-05-17作者简介:常泓(1968-),女(汉),山西榆次人,副教授,博士,主要从事分子生物学及生物技术的研究。基金项目:国家自然科学基金资助课题(30271003);山西省科技攻关项目(011030);山西省青年基金项目(20021038)2005常泓等:PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA6530KD的二聚体,对热稳定,可耐93℃的高温,琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果:配制2%琼作用
8、最适pH为710～711。其氨基酸顺序与山羊脂糖凝胶,取10μL扩增产物电泳。保持电流肝脏蛋白
