黑曲霉胺氧化酶的制备及降解生物胺的研究

黑曲霉胺氧化酶的制备及降解生物胺的研究

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1、本论文以黑曲霉诱导产生胺氧化酶的提取条件、酶学性质和对生物胺降解为主要研究内容。胺氧化酶属于胞内酶,细胞破碎优化条件为:破碎总时间7min,功率为180w,间隔时间为15s,菌丝浓度为10%o采用硫酸镀盐析的饱和度为55%,并透析获得粗酶液。研究了黑曲霉胺氧化酶粗酶液的酶学性质:最适温度为30°C,最适pH为7.0;酶稳定性为:在20°C〜30°C条件下有良好的稳定性,30°C以上稳定性较差;在pH6.3〜7.8之间范围内具有良好的pH稳定性(残余酶活在83%以上)。黑曲霉胺氧化酶对8种生物胺(尸胺,腐胺,酪胺,苯乙胺,组胺,色胺,精胺,亚精胺)的降解特异行为

2、:腐胺的降解率达到了95%,其次是酪胺,达到了73%;对酱油样品中总生物胺的降解率达到了69.50%。关键词:黑曲霉;胺氧化酶;酶学性质;生物胺AbstractThispaperresearchedtheoptimumconditionofextraction,enzymaticpropertiesandsubstratespecificityofAspergillusNiger.Dueingtothattheamineoxidaseisintracellularenzyme,wefoundtheconditioncelldisruptortobe:theto

3、taltime7min,thedisruptionpower180w,theintervaltimeofdisruptionprocesswas15s,mycelialconcentrationis10%.theconcentrationofammoniumsulfateusingforsalting-outwas55%..TheCrudeamineoxidasefromA.Nigerwasobtairi・Enzymologypropertiesasfollows:theoptimumtemperaturewas30°C,theoptimumpHwas7.0;

4、Theenzymewasstablein20°C〜30°Candunstableintheconditionofover30°C;thisenzymehadbetterpHstabilitybetweenpH6.3-7.8(residualenzymeactivityinmorethan83%).AccordingtotheresultofexperimentwefindthattheamineoxidasethatinducesA.Nigerhasabetterdegradatingabilityto8kindsofbiogenicaminesamongth

5、efbod(putrescine,cadaverine,tyramine,phenethylamine,histamine,tryptamine,spermine,spermidine).thedegradatingabilitytoputrescinereaches95%,thesecondwastotyramine,reaches73%,thedegradationabilitytothecadaverinewasmostweak,only17%.Thedegradatingabilitytotherestoffivekindsofbiogenicamin

6、eswerebetween33%and45%.Keywords:AspergillusNiger;Amineoxidase;Enzymaticproperty;biogenicaminesAbstractIII1.1生物胺的简述11.1.1生物胺的理化性质11.1.2生物胺的形成11」・3生物胺的毒性11.2食品中的生物胺21.2.1肉及肉制品21.2.2水产品及其希1J品41.3生物胺的消除41.4研究目的和意义5二材料与方法62.1实验材料62.1.1材料与试剂62.1.2仪器与设备62.2实验方法62.2.1黑曲霉培养62.2.2酶活测定62.2.3酶提

7、取条件的优化72.2.4胺氧化酶酶学性质研究82.2.5底物特异性和酱油生物胺降解92.2.6高效液相色谱(HPLC)分析9三结果与分析113.1酶提取条件的优化113.1.1超声提取吋间的影响113.1.2超声提取功率的影响113.1.3超声频率对酶活的影响123.1.4菌丝浓度的影响133.1.5粗酶液的盐析133.2胺氧化酶粗酶液酶学性质143.2.1胺氧化酶粗酶液最适温度143.2.2胺氧化酶的最适pH143.2.3胺氧化酶温度稳定性153.2.4胺氧化酶pH稳定性153.2.5金属离子对胺氧化酶酶活的影响163.2.6酶抑制剂对胺氧化酶酶活的影响17

8、3.2.7盐水浓度对胺氧化酶酶活的影响

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