羟基脲衍生物体外抗Hep-2细胞的活性测定

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1、径基服衍生物体外抗Hep・2细胞的活性测定（江西卫生职业学院江西南昌330052）【摘要】目的:通过MTT法检测羟基服衍生物的体外抗肿瘤活性，筛选出有体外抗肿瘤作用的径基嫌衍牛物。方法:选用Hep・2肿瘤细胞作为模型，然后利用MTT法从六种轻基魔衍牛物中筛选出对Hep・2肿瘤细胞有抗肿瘤作用的，并计算其对Hep-2细胞的半数抑制浓度，即IC50值。结果:筛选得到对Hep-2细胞有很好的抗肿瘤活性的衍牛物有3种。计算得到的每种轻基服衍牛物对Hep・2细胞的半数抑制浓度IC50值。结论:HY・CN、HX-

2、CN和HX■叔对Hep・2细胞有非常好的抗肿瘤作用。【关键词】径基腺衍生物；MTT；IC50【中图分类号】R97【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）01-0178-02MTT法被广泛用于大规模抗肿瘤药物的体外筛选⑴和肿瘤放射敏感性的测定等［2］。本实验选用Hep-2细胞进行羟基月尿衍牛物的体外抗肿瘤活性筛选。1.实验材料、试剂与仪器人喉癌上皮细胞Hep-2细胞株（南京凯基牛物科技发展有限公司）。各种自制羟基月尿衍生物：2.4—二氯节氧基腺（HX-CI）；4—氧节氧基眠（HX-CN

3、）；4—硝基节氧基服（HX-NO2）；4—叔丁基节氧基月尿（HX■叔丁基）；N-（2.4—二氯节基），N・（2.4—二氯节氧基）W（HY-CI）；N・（4—氧节基），N-4氧基）服（HY-CN）；阳性对照药物：羟基月尿（上海达瑞精细化学品有限公司批号20100612）o阴性对照：含5%的胎牛血清1%二甲亚飒RPMI-1640培养基。RPMI-1640培养基（美国Hyclone试剂公司）；胎牛血清（杭州四季青工程材料有限公司）；四甲基偶氮卩坐蓝（MTT）o680型酶联免疫检测仪（BIO-RAD公司）；9

4、6孔培养板（美国Costar）o1.方法（MTT法）⑴调整Hep-2细胞的浓度为5×104个/ml左右，以100μL/孔接种于96孔板中，每组浓度设置5个复孔，同吋设对照组、空白组。(2)将配制好的各浓度的受试疑基服衍生物和对照物以100μL/孔接种于96孔板中，空白对照组以100μL/孔加入药物稀释液。(3)将96孔板置于37°C,95%空气和5%C02培养48h后,每孔加MTT(5g/L)20μL。(4)继续孵育已加药的Hep・2细胞4h,小心地用枪吸弃孔内的1

5、50ul培养液，然后每孔加入150ulDMSOo完成后，将96孔板放置在酶联免疫检测仪的凹槽上，开启酶联免疫检测仪和电脑，用电脑设置波长及震荡lOmin,使结晶充分地溶解，最后在酶联免疫检测仪490nm处测得各孔的吸光值。(5)选用空白对照组调零，在波长为490nm处，用酶标仪测定各孔吸光值，计算得细胞生长抑制率，当抑制率&洋;30%时，细胞对该药敏感。(6)细胞生长抑制率的计算公式：细胞生长抑制率(%)=(1・给药组/空白对照组)×100%⑺重复实验2次。3•实验结果轻基脓衍生物作用于H

6、ep・2细胞48h,然后用酶联免疫检测仪，测出甲喷溶液OD值。最后，根据Hep・2肿瘤细胞生长制率公式和IC50计算公式，将所得到的OD值用Excel2003进行计算,结果见表部分疑基腺衍生物对Hep・2细胞的生长抑制率比对照药物轻基腺的抑制率更加高，有的甚至高达90%以上,如疑基月尿衍生物HY-CNo从IC50上看，瓮基腺衍生物HY・CN、HX・CN、HX■叔、YB4均比轻基脓的低，证明它们的抗肿瘤细胞Hep-2活性都较强。以受试轻基脓衍生物浓度作为横坐标，生长抑制率作为纵坐标，分别绘制各疑基月尿衍

7、生物作用于Hep・2细胞的生长抑制曲线，疑基腋衍生物对Hep・2细胞的生长抑制率呈正向关系，有浓度依赖。选用SPSS18.0软件对生长抑制率进行t检验，得P<0.05,因此各梵基月尿衍生物和疑基月尿对Hep・2细胞的抑制率有显著的差别。4.讨论结果证明，部分疑基腺衍生物抗肿瘤活性优于疑基腺，有三种疑基魔衍生物对Hep・2细胞有较好的抗肿瘤活性。在高浓度吋，部分轻基腺衍生物对肿瘤细胞的抑制率达到90%以上。这可能是由于疑基腺衍生物脂溶性比疑基腺更强,从而进入细胞内的药物浓度更高，能够更好地和药物靶

8、点结合，提高疑基魔衍生物的生物利用度，因而发挥出更强大的细胞毒性作用，最后诱导肿瘤细胞凋亡。【参考文献】⑴吴慧•抗肿瘤药物体外筛选方法[J]•医学理论与实践，2005,18(2)：146-148.[2]秦婷婷，唐东平・MTT方法体外应用新进展[J].现代肿瘤医学,2008,16(10)：1835-1837.