产_氨基丁酸乳酸菌的分离筛选及其主要性能

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1、第9卷第3期中国食品学报Vol．9No．32009年6月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyJun．2009产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离筛选及其主要性能穆琳阮晖唐彦捷陈启和李青青叶雪飞何国庆（浙江大学食品科学与营养系杭州310029）摘要γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然存在的功能性氨基酸，具有降血压、改善脑功能、镇静、增强长期记忆及提高肝、肾机能等功效。可利用微生物发酵制得GABA。本文从西藏干酪、乳酸饮料、自制泡菜等样品中分离到7株乳酸菌，

2、通过HPLC-AFS法检测GABA含量，筛选出3株GABA高产乳酸菌株，再用GYP培养基30℃恒温厌氧培养48h后，其GABA产量分别达到383、345和813μg/mL。通过对产量最高的ML7菌株进行菌落、菌体形态观察和API20A系统生理、生化特性鉴定，初步确定其为发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentum）。关键词γ-氨基丁酸发酵乳杆菌分离筛选鉴定文章编号1009-7848（2009）03-0020-06γ-氨基丁酸（γ-aminobutyricacid，GABA）又本文从样品中分离筛选

3、出产γ-氨基丁酸的称氨酪酸，是一种天然的功能性非蛋白质氨基酸，乳酸菌，并对产量较高的菌株做初步鉴定，为利用广泛存在于动植物体内。作为中枢神经系统重要乳酸菌发酵生产富含GABA的乳制品提供基础数[1]的抑制性神经递质，GABA在人脑能量代谢过程据。中发挥着重要作用。GABA具有激活脑内葡萄糖代谢、降血氨、抗惊厥、降血压、增进脑活力、增强1材料与方法[2～5]长期记忆、提高肝、肾机能、改善更年期综合症1.1菌株来源等重要生理功能。3种自然发酵制成的干酪，分别产自西藏的目前，我国对GABA的研究主要集中在生产拉萨

4、、昌都和德格3个地区；养乐多乳酸菌饮料，技术及其应用上，即通过微生物发酵或植物提取购于日本；泡菜，市售；保加利亚乳杆菌，实验室保方式获得GABA，然后作为添加剂或强化剂在食藏菌种。品中使用。相比之下，研制在加工过程中可自然产1.2试剂生GABA的食品，具有工艺简单、成本低廉、食用γ-氨基丁酸（99.99％分析纯试剂），sigma公方便、安全等优点，因而受到越来越多的关注。在司；甲醇、乙腈，色谱纯试剂；三氯乙酸、KH2PO4、醋日本，对此类富含GABA的功能性食品的研究已酸钠；OPA衍生溶液：硼酸、KOH、巯

5、基乙醇、邻苯取得较大进展。大久长范等人利用富集技术，以糙二甲醛、冰醋酸；API20A试剂盒，梅里埃生物有限米、米胚芽、茶叶、大豆等为食品原料，成功研制出公司。[6][7]GABA大米、GABA茶等产品，其中的GABA含1.3培养基量分别达到0.183mg/g和2.0mg/g。利用高安全改良脱脂乳培养基（用于菌种活化和保藏）：性的乳酸菌、酵母菌、霉菌等微生物生产富含GA-脱脂奶粉12％，K2HPO41％，KH2PO41％。BA的食品成为研究的新热点。尤其是利用乳酸菌MRS液体和固体培养基（用于分离和培养乳发酵

6、生产富含GABA的酸奶、乳酸饮料等乳制品酸菌）：蛋白胨10g，酵母提取物5g，柠檬酸二铵2具有很高的研究价值。g，葡萄糖20g，MgSO4·7H2O0.58g，MnSO4·4H2O0.25g，肉膏10g，K2HPO42g，乙酸钠5g，吐温收稿日期：2008-06-29801mL，琼脂15g（配制固体培养基时使用），蒸馏作者简介：穆琳，女，1984年出生，硕士通讯作者：何国庆水1000mL。调pH6.2~6.4，121℃灭菌15min。第9卷第3期产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离筛选及其主要性能21GYP液体培养基

7、（用于深层发酵培养）：葡萄1.6产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选糖10g，酵母10g，蛋白胨5g，无水乙酸钠2g，1.6.1种子液培养在厌氧培养管中装入10mLMgSO4·7H2O0.02g，MnSO4·4H2O0.001g，NaCl脱脂乳培养基，将保存于脱脂乳液体培养基中的0.001g，FeSO4·7H2O0.001g，琼脂15g（配制固体菌种分别以5％的接种量接入，30℃静置培养24培养基时使用），蒸馏水1000mL，pH6.8，121℃h。灭菌15min。1.6.2深层发酵培养在厌氧培养管中装入101.4仪

8、器与设备mLGYP液体培养基，然后以5％的接种量分别将Waters2695高效液相色谱仪；Waters2475各种子发酵液接入其中，30℃静置培养48h。荧光检测器；Sartorius电子天平；无菌注射器；培1.6.3γ-氨基丁酸的检测采用高效液相色谱-养皿；PHS-9V型酸度计，杭州华光无线电厂；L-荧光检测法检测γ-氨基丁酸。550台式高速离心机；Elecreolux冰箱；LRH-1501.6.3.1样品预处