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《几种生物碱基的反相高效液相色谱分离及人尿中尿嘧啶和腺嘌呤的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、.。Vol12分析科学学报No11996几种生物碱基的反相高效液相色谱分离及人尿中尿嚓咤和腺嘿岭的测定’关关石义林“韩金土气刘钵春程介充,,(武汉大学化学系武汉刁30072),;一.,文报道在比:KHO‘摘要本SpherisorbC柱上以HPO刃溶液作流动相(PH40)同时分离和浏定胞啥吮、尿咄吮、脚腺咭吮、腺嗦吟5,,和黄嗦吟种生物城墓用于人尿分析标准加入回收率在92.5~105.5%之问.关键词反相HPLC生物城基尿,研究生物碱基的分离和测定有助于研究人体内核酸的代谢过程并能预示某些病变.,,的发生在生化和临床医学上都
2、有十分重要的意义近年来反相高效液相色谱法分离和,,测定生物碱基的文章时有报道〔一幻大多采用在流动相中加入不同的有机改性剂或梯度:一:‘,,淋洗技科,j.本文仅以H护。KHPO缓冲溶液作流动相(pH4.0)用恒浓度淋洗法可同、.、a、时分离和测定胞嗜咤(cyt)尿啥健(ura)黄嗓岭(xn)胸腺吻睫(y)和腺嗦吟(Ade)Th方、、,,92.5一法简单快速灵敏用于人尿中尿嗜睫和腺喋岭的分析标准加入回收率在工05.5%之间·实验部分1仪器与试剂一、一、一岛津Lc6A高效液相色谱仪cR3A记录仪sPD6Av紫外检测器旧本);超声
3、波清,...,.;sprrbe;:5协m150又4d洗器(上海超声仪器厂)加iso柱(6mm1大连化学物理研究所)、、(上;;黄嚓吟胸腺嗜睫胞崛咤海生化试剂厂)尿嗜咤(上海试剂二厂)腺嗦岭进口.:...0ZmolLNa0H,分装标准储备溶液sms/mL除黄嗓吟滴加少量0/溶解外其余均用一一.,2:IO,水溶解储存于4℃冰箱内工作溶液除腺嚓吟的浓度为os/mL外其余均为.,..-z;:3;2饰引。L临用前取上述储备溶液稀释H尹众KHPO缓冲溶液以0Zmof/LHPO和.,.,0;Zmol/LKH尹。相混合在PH计上调节至所需
4、声值其他试剂均为分析纯水为二次蒸馏水.2实验方法、、、、.oL)胞吻睫取一定量(20尿咯咤黄嗦岭胸腺啥咤腺嚓岭及其混合物注入色谱柱,湖北省自然科学基金资助课题二湖,*,河南信阳师院化学系北咸宁教院化学系:收稿日期1994一12一23一.Hs‘KH:PO。0),H:;KHZPo;100olL,流动相为即缓冲溶液(pH4即和总浓度为m/以.,.,,0smL/min的流速进行淋洗检测波长为260nm柱温35℃峰面积定量流动相在使用..GS15min,前经砂芯漏斗抽滤并超声脱气进样前色谱柱预先用流动相平衡lh结果与讨论1’检测波长
5、的选择:,,嗦岭类和啼咤类化合物均具有共扼离域大键结构在紫外光区有强的光吸收特性..〔‘」26m其最大吸收波长在250~280nm之间本文选择0n作为检测波长2流动相的选择.,2I,其PH值的影响在酸性溶液中本文所研究的化合物均有不同程度的质子化难易.:;l,程度依次为腺嗦吟>黄嗦岭胞喻睫>尿啥睫>胸腺晦咤图结果表明当PH值一定,,;,,,时化合物的极性越小保留时间越长随春PH值升高质子化程度减弱保留时间增长..,,尤以腺嗓吟最为显著但当pH簇35时各化合物均出现双峰这可能是由于在较强的,、,酸性条件下嚎岭崛睫环上的氮原子
6、质子化程度显著增大而产生两种形态从而导致双..3一.HPZ;峰的出现本文选用PH40的认KHPo缓冲溶液(溉一一~~曰~~~一一-一~~.~卜一~目目~~一~‘一-~---~50100150200:.,.HPOKHPO(.月/L).4石5pH.onnn.ph..。”.。”eFig1Ef交ectfPHon比erete加ti姆F始2EfteCtd佣ph扭说如donthC,。,mobilepse,1ommolLH:PO。一KHZPO;reten1“柱ha/枷me.burfersolution;Columntemrature,3
7、5,C,nowChrotograp拍end胜lons:40;theothersaspemaCoPH,,...rate0smL/min;detectionwavelensth260nm;in1珑.,.ra,.an,.,..t,.,.an,,,,e.1Cyt2U3X刁巧y5A山1仰2Ura3X4Thy5Ad2.2磷酸盐浓度的影响在10一Zoommol/L范围内试验了磷酸盐缓冲溶液浓度对保留,.,22,10mmof/L时间的影响结果如图由图可见当磷酸盐浓度低于时腺嚓吟和胞喀,咙的保留时间随磷酸盐浓度的增大而减小;当缓冲溶液浓度大
8、于10Ommol/L时各组分饭,10mmol/L的磷酸盐缓冲溶液4..的值保持恒定本文选用(哪0)作流动相3流速的影响..,.在0一12mL/mi。范围内试验了流动相流速对保留时间的影响结果见图3随着急,.1.0m,流速的增大保留时间几乎呈线性减小但是当流速大于或等于L/m尔时相邻两20:,.组分的△t
