饲料色氨酸含量测定

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1、饲料中色氨酸测定方法——分光光度法制作人：色氨酸（Try）色氨酸β-吲哚基丙氨酸，为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。鱼类的必需氨基酸。色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质。测定方法：分光光度法GB/T15400-94原理饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。测定方法：分光光度法GB/T15400-94试剂除注明者外均

2、为分析纯。水为蒸馏水。硫酸溶液：量取589mL硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却后用水稀释至1L。1％对二甲氨基苯甲醛溶液：1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于21.2mol/L硫酸中并定容100mL。0.2％亚硝酸钠溶液（m/V）。10％氢氧化钾溶液（m/V）。L-色氨酸，色谱纯。L-色氨酸标准溶液：准确称取25.0mgL-色氨酸于小烧杯中，加少量0.1mol/L氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到250mL棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100μg/mL。注：本标准溶液4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变。测定方法：分光光度法GB/T15400-94仪器

3、、设备分析天平：感量0.1mg。分光光度计。离心机：转速4000r/min。实验室用粉碎机。培养箱。容量瓶：25mL、50mL、250mL。10mL具塞试管。刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。测定方法：分光光度法GB/T15400-94试样的制备1.选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过0.25mm孔径筛（60目）。2.按GB6433脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。测定方法：分光光度法GB/T15400-94分析步骤1.工作曲线的绘制（1）吸取色氨酸浓度为100μg/mL的标准溶液5.

4、00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25mL棕色容量瓶中用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70μg/mL。（2）吸取各浓度溶液1mL，分置具塞试管中，空白管加1mL水向每支试管内加入氢氧化钾溶液1mL，混匀，将试管放入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，从冷水盆中取出试管，摇匀，在室温（20～30℃，下同）放置30min。（3）向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。（4）以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各溶液吸光度值。（5）以色氨酸浓

5、度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式。测定方法：分光光度法GB/T15400-942.样品测定（1）称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精确至0.1mg。（2）水解：将试样置于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓慢加入25mL氢氧化钾溶液，使试样湿润且不粘壁，置40±1℃培养箱中水解16～18h。（3）离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15min。（4）显色：取2mL上清液置具塞试管中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀。每个试样另取2mL上清液

6、于具塞试管中，加5mL硫酸溶液作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。（5）比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值。测定方法：分光光度法GB/T15400-94测定方法：分光光度法GB/T15400-94计算公式测定方法：分光光度法GB/T15400-94结果的表示两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。试样脂肪含量小于4%时，式(1)和(2)所得结果在允许偏差之内。重复性两个平行样品测定值的相对偏差，当色氨酸含量小于0.1%时，不

7、大于4%；0.10%～0.50%时，不大于3%；大于0.50%时，不大于2%。