Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册

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1、Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录： 1系统的组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2系统的使用 2.1开机顺序 2.2软件的快速使用说明 2.3显微镜的触摸屏控制 2.4关机顺序 3系统的维护 1系统的组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图： 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜扫描检测单元 实物照片说明： 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2系统的使用 2.1开机顺序 （1）打开稳压电源（绿色按钮） 等待2分钟（电压稳定）后，再开其

2、它开关 （2）主开关[MAINSWITCH]“ON” 电脑系统[SYSTEMS/PC]“ON” 扫描硬件系统[COMPONENTS]“ON” （3）打开[电动显微镜开关] 打开[荧光灯开关] （注：具有5档光强调节旋钮） （4）Ar离子激光器主开关“ON” 顺时针旋转钥匙至“—” 预热等待约15分钟， 将激光器[扳钮]由“Standby”扳至 “Laserrun”状态，即可正常使用 （5）打开[电脑开关]，进入操作系统 注：键盘上也具有[电脑开关] 2.2软件的快速使用说明 （1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标 （2）进入ZEN界面，弹出对话框

3、： “StartSystem”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。 “ImageProcessing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。 （3）软件界面： 1功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain） （注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用） 2动作按钮；3工具组（多维扫描控制）；4工具详细界面；5状态栏；6视窗切换按钮； 7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口；9文档浏览/处理区域；10视窗中图像处理模块 动作按钮： Single——扫描单张图片、并在图像预览

4、窗口显示。 Start——开始扫描单张图片或一个实验流程（1组图片，如XYZ、XYT等）。 Stop——暂停/结束扫描。 New——建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦LSM光路切换（ZEN软件界面右上角）： Ocular——通过观察筒用眼睛观察。（激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。） Camera——光路切换至相机。 LSM——共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置： “Ocular”——> “LightPath”——> 点击物镜图标，选择物镜——> 样品聚焦。 透射光控制（TransmittedLightControl） 反射光光

5、闸控制（ReflectedLightShutter） 荧光激发块选择（Reflector） 共聚焦LSM扫描设置 点击“LSM”（ZEN软件界面右上角），系统切换至共聚焦扫描光路： 光路设置： SmartSetup——自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法， 应用“Apply”。 （注：Fastest为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Bestsignal为最佳信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。Bestcompromise为兼顾速度与信号的折中式扫描。） 扫描图像参数设置： 每个通道的精细调节： 包括： （1）Pinhole的调节（一般设为1AU。该值越大，则

6、信号越强，但共聚焦图像效果会降低。原则上， 在保证图像质量的前提下，该值越接近于1AU越好）； （2）MasterGain的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain值越小越好）； （3）DigitalOffset的调节（可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度的扣除。原则上，在保证图像质量的前提下，DigitalOffset值越接近于0越好）； （4）DigitalGain的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain值越接近于1.0~1.2越好）； （5）另外，对于每

7、个通道，需要灵活调节激光的强度（激光强度越高，则信号越强，但噪音也相应增强，同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。） 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数。 如果预览图像的效果可以，则先“Stop”，再点击“Single”或“Start” 即可完成图像的扫描。 图像的保存： 三种方法： （1）“File”菜单下，“Save” 或者“SaveAS”。 （2）点击右下角按钮。 （3）点击工具栏按钮。 （如图所示） 另外，通过“File”菜单下的“Export”，也可将图像以其