细胞生物学》研究方法

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1、Helacell研究方法和手段医学细胞生物学1.光学显微镜2.电子显微镜3.扫描探针显微镜100μm100nm1nm一、显微技术普通光学显微镜相差显微镜微分干涉差显微镜荧光显微镜激光扫描共聚焦显微镜一、显微技术1.光学显微镜普通光学显微镜最大分辨率，0.2um原理：利用一组透镜将标本连续放大。一、显微技术1.光学显微镜一、显微技术1.光学显微镜分辨率或分辨力在人的明视距离25cm处，能清楚的分辨两点的最小间隔的能力，用R来表示。R=0.61λ/nsinα光线名称可见光紫外光0.1kv电子束10kv电子束100kv电子束波

2、长nm390~76013~3900.1230.01220.00387一、显微技术普通光学显微镜聚光器目镜标本反射棱镜光源物镜普通光学显微镜一、显微技术1.光学显微镜标本制备：取材固定染色－观察直接涂片甲醛、戊二醛、乙醇包埋切片(固定)普通光学显微镜一、显微技术1.光学显微镜口腔上皮细胞血细胞Fulgen染色2）应用：主要观察活细胞倒置相差显微镜一、显微技术1.光学显微镜1）利用光的衍射和干涉效应神经母细胞10X4010X60倒置相差显微镜一、显微技术1.光学显微镜倒置相差显微镜一、显微技术1.光学显微镜荧光显微镜一、显微

3、技术1.光学显微镜微管呈绿色、微丝红色、核蓝色微管呈绿色染色体呈蓝色荧光显微镜一、显微技术1.光学显微镜原理：物镜标本分光镜滤光片滤光片光源：紫外光标本内的荧光分子：标本自身含有荧光物质用荧光物质标记标本检测细胞表面或细胞内特定的抗原应用：特点：荧光显微镜一、显微技术1.光学显微镜荧光检测细胞结构的三维重建应用：激光共聚焦扫描显微镜一、显微技术1.光学显微镜原理：激光共聚焦扫描显微镜一、显微技术1.光学显微镜共聚焦针孔物镜的焦平面光源针孔物镜检测器分光镜激光光源激光共聚焦扫描显微镜一、显微技术1.光学显微镜透射电子显微镜

4、扫描电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜透射电子显微镜成像原理:电子束穿透样本而成像应用:观察细胞内部超微结构一、显微技术2.电子显微镜透射电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜透射电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜标本的制备：固定包埋切片染色（重金属盐）观察透射电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜1)光源2)透镜3)成像原理4)标本处理与光学显微镜比较:透射电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜极细的电子“探针”扫描样品表面，收集二次电子成像。主要观察样品的表面三维形态结构。扫描电子显微镜成像原理主要应用扫描电子显微镜一

5、、显微技术2.电子显微镜小肠绒毛AbsorptiveEpithelialcellmicrovilli扫描电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜带有冠细胞的人类卵子卵子表面的精子扫描电子显微镜一、显微技术2.电子显微镜细胞分离方法:破坏胞外基质和细胞间的连接细胞悬液单一种类细胞离心或者吸附性差异蛋白酶消化机械剪切消化、机械并用二、细胞的分离和培养1.从组织中分离皮肤瘢痕小鼠胸腺骨髓间质干细胞平滑肌细胞成纤维细胞T细胞大鼠骨髓平滑肌研磨、过滤、离心吸附培养瓶底剪碎、蛋白酶、离心附在瓶壁爬出来二、细胞的分离和培养1.从组织中分离

6、流式细胞仪应用：1)分选细胞2)细胞表型分析3)染色体分析4)DNA分析二、细胞的分离和培养2.细胞分选（cellsorting）基本原理：激光在一定的营养条件下将细胞在体外进行培养，使之继续生长增殖的过程。基本材料与器材：培养容器，培养基，血清，CO2培养箱，超净工作台，倒置显微镜二、细胞的分离和培养3.细胞培养（cellculture）超净工作台CO2培养箱细胞培养无菌操作细胞体外生长的条件:1）需要营养;2）适宜温度、湿度;3）适宜的pH值;4）无菌的环境以及支持物.二、细胞的分离和培养3.细胞培养（cellcul

7、ture）传代培养(subculturecell)：将细胞按一定的比例转瓶扩大培养。原代培养(primaryculturecell)：直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。二、细胞的分离和培养3.细胞培养（cellculture）细胞系中挑出一个细胞，培养形成的克隆。原代培养的细胞经传代成后就叫细胞系。细胞系(cellline)：细胞株(cellstrain)：二、细胞的分离和培养3.细胞培养（cellculture）细胞系/株细胞株类型细胞株名称代号价格人肿瘤乳癌MCF-7400宫颈癌Hela400动物肿瘤大鼠

8、嗜铬细胞瘤PC-12400小鼠骨髓瘤SP2/0400正常动物细胞鼠胚胎成纤维细胞3T3-Swiss400NIHSwiss鼠肺成纤维细胞NIH/3T3400仓鼠卵巢细胞CHO400正常人细胞人胚肾细胞HEK293400人脐静脉内皮细胞HUVEC500破坏细胞膜低渗超声振荡机械研磨各种细胞器及大分子离心层析电泳生物质普技