3、细胞生物学研究方法

《3、细胞生物学研究方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第三章细胞生物学的研究方法尼康E-600显微镜普通光学显微镜普通显微镜由聚光器、物镜和目镜三部分组成。石蜡包埋机HE染色荧光显微镜荧光显微照片(微管（绿）,微丝（红）,核（蓝）)倒置相差显微镜体外培养的Hela细胞laserconfocalscanningmicroscope,LCSMLCSMImageofaXenopusMelanophoremicrotubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)名称波长（nm）可见光760-390紫外线390-13X射线1

2、3-0.05γ射线1-0.005电子束：100V0.12310000V0.0122100000V0.00387各种光波的波长比较正在凋亡的乳腺细胞核被膜破裂，染色质凝集细胞毒T细胞结合到靶细胞（肿瘤细胞）上细胞毒T细胞杀死了靶细胞JEOL扫描电子显微镜一个正在分裂的动物培养细胞，扫描电镜图片早期小鼠胚胎的扫描电镜照片A：2细胞时期B：4细胞时期C：8-16细胞时期，桑椹胚D：胚泡期ABCD制作金属复型冰冻蚀刻电镜照片（一）利用物理学和生物学特性可简单有效地分离和筛选细胞利用细胞贴壁和悬浮生长的特性根据

3、细胞的密度分离选择性培养和克隆化培养c102550nMsub-G1:0.9%G0/G1:47.4%S:24.9%G2/M:26.9%sub-G1:3.5%G0/G1:56.1%S:7.4%G2/M:33.0%sub-G1:3.8%G0/G1:25.5%S:9.2%G2/M:61.5%sub-G1:4.0%G0/G1:15.8%S:13.1%G2/M:67.1%countssub-G1:2.41%G0/G1:36.6%S:31.34%G2/M:22.95%sub-G1:8.93%G0/G1:62.88%

4、S:10.63%G2/M:17.56%DNAcontentsub-G1:11.37%G0/G1:59.32%S:7.68%G2/M:21.62%sub-G1:13.23%G0/G1:58.39%S:7.62%G2/M:20.76%2n4nc2505001000nM2n4n流式细胞术测定细胞周期PIcontrol122436hCell10.73%1.35%94.71%3.21%0.73%1.52%96.86%0.89%3.83%4.05%90.16%1.96%28.62%17.72%53.22%0.43

5、%AnnexinV-FITC流式细胞术测定细胞凋亡67.76%3.18%7.55%48.66%4.53%17.33%50.12%2.91%10.32%CD38AnnexinⅤControl1uM5uM用CD34磁珠分选后，用药处理36h，对CD38和AnnexinV染色后用流式检测。当原代细胞经增殖达到一定密度后，直接从体内获取的组织或细胞进行首次培养将细胞分散，从一个培养器按一定比例移到另一个或几个容器中扩大培养。能够在体外进行无限繁殖和传代的细胞，称为细胞系通常为来源于恶性肿瘤组织的细胞或正常组织

6、培养的细胞在某些特殊条件下形成不死的变异细胞分散酶；英文名称：dispase；用于动物细胞的分散培养，具有组织解聚功能，但不损害细胞膜，可保持上皮细胞活力群体培养（左）和克隆培养（右）四、核酸的分离纯化与鉴定细胞匀浆低速离心1000g，10分钟整个细胞，细胞核和细胞骨架中速离心20000g20分钟线粒体，溶酶体，过氧化物酶体沉淀高速离心80000g1小时微粒体沉淀超速150000g3小时核糖体或者可以沉淀病毒病人A病人B四、核酸的分离纯化与鉴定1.DNA存在于细胞核和线粒体，RNA存在于细胞核和细胞质

7、2.离液剂可以使膜脂，蛋白质变性，从而释放核酸，其中核酸具有带负电荷的磷酸骨架比蛋白质，脂类和多糖等具有更高的亲水性，通过选择性沉淀和差速离心使核酸与他们分离。加入氯仿可以去除细胞内的脂类，同时使蛋白变性。用沉淀的方法可以获得水相中的核酸，如用乙醇在低温孵育，可以沉淀DNA，异丙醇可以降低水溶液的极性，一般用于沉淀RNA分子，3.同DNA相比RNA分子量高,易于聚集，细胞裂解后进行高速离心，RNA分子为于上层水相中，使RNA与DNA分离。4.硅胶膜可以有效的吸附溶液中的核酸，用于大样本核酸分离。3H-

8、尿嘧啶脉冲标记的细胞，示异染色质区（核内白色区）无转录活性一基因表达的定量分析二基因表达的上调和下调技术三蛋白质相互作用的研究技术四蛋白质与核酸相互作用的研究技术五生物芯片技术六蛋白质组学技术七高通量测序技术八模式动物个体水平的基因操作技术一基因表达的定量分析Northern印迹检测组织和细胞中特异mRNA用带有反射性或非放射性标记的单链cDNA，RNA片段或寡核苷酸为探针，探针与待检测的RNA通过碱基互补配对而结合，检测mRNA分子1.印迹杂交技术定量