动物细胞制药pa(I)

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1、第三章动物细胞制药动物细胞的结构较原核细胞复杂得多，而且以不是靠一个细胞包办一切生理活动，各细胞都有明确的分工。为了适应其功能需要，细胞的形态也有了相应的变化，我们称这种变化为分化。如：红细胞呈圆盘形；神经细胞呈纤维形。然而当细胞离体培养时这些分化的形态经常会发生变化。我们通常将离体培养的细胞分为：贴壁依赖型（贴壁细胞）和贴壁非依赖型（悬浮细胞）。一、动物细胞的形态和生理特点贴壁细胞这类细胞的生长必须有给你贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖。当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞型或上皮细胞型。这些细胞形态不是绝对

2、的，它随培养条件的变化而有所变化。一、动物细胞的形态和生理特点悬浮细胞这类细胞的生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状态生长。一、动物细胞的形态和生理特点兼性贴壁细胞这类细胞并不严格地依赖支持物表面生长，一定条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长。这类细胞称之为兼性贴壁细胞。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点细胞的分裂周期长动物细胞分裂周期所需的时间一般为12~48h，它不仅随细胞种属的不同而不同，同一种属，不同部位的细胞所需的时间也不同。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象当细胞在基质上分裂增殖，逐渐会合

3、成片时，即每个细胞与其周期的细胞相互接触时。细胞就停止繁殖。此时若能保持充足的营养，细胞仍可存活相当一段时间。但细胞密度密度不再增加，所以该现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点3.正常二倍体细胞的生长寿命是有限的当细胞离体培养开始，我们称之为原代培养。以后经传代后，即成为有限细胞系。细胞经若干代传代培养后逐渐死亡，该时间的长短取决于细胞来源的种族和年龄。当细胞经自然的或人为的因素转化为异倍体后，该细胞即可转变为无限细胞系，或称连续细胞系。此时细胞的寿命将是无限的，因此更适合于工业化生产的需要。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生

4、理特点动物细胞对周围环境十分敏感动物细胞比植物细胞的培养难度大得多，因为动物细胞膜外没有细胞壁保护，仅有一层很薄的粘多糖蛋白。因此动物细胞对渗透压、pH、离子浓度、剪切力、微量元素等的变化耐受力很弱。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点动物细胞对周围环境十分敏感动物细胞比植物细胞的培养难度大得多，因为动物细胞膜外没有细胞壁保护，仅有一层很薄的粘多糖蛋白。因此动物细胞对渗透压、pH、离子浓度、剪切力、微量元素等的变化耐受力很弱。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点动物细胞对培养基的要求高动物细胞对营养的要求高，不仅需要12种必需氨基酸，还需要多种细胞因子和贴壁因

5、子等才能生长，这种要求还随细胞种类的不同而不同。一、动物细胞的形态和生理特点动物细胞的生理特点动物细胞蛋白质的合成和修饰功能与细菌不同动物细胞相对于原核细胞，它们多半是分泌在胞外的，收集纯化方便，得到了较完善的翻译后修饰，特别是糖基化，因此更与天然的产品一致，更适合于临床使用。一、动物细胞的形态和生理特点一、生产用动物细胞的获得原代细胞原代细胞是直接取自动物组织、器官，经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。二、生产用动物细胞的要求和获得一、生产用动物细胞的获得二倍体细胞系原代细胞经过传代、筛选、克隆，从而从多种细胞成分的组织中挑选并纯化某种具有一定特性的细胞株。该细胞株仍具备“正常”细

6、胞的特点：①它的染色体组型仍是2n的核型；②具有明显的贴壁依赖和接触抑制的特性；③只有有限的增值能力，一般可连续传代培养50代；④无致瘤性二、生产用动物细胞的要求和获得一、生产用动物细胞的获得3.转化细胞系这类细胞是通过某个转化过程形成的，他常常由于染色体的断裂变成了异倍体，从而失去了正常细胞的特点，而获得了无限增值的能力。由于转化的细胞具有无限生命力，而且常常倍增时间较短，对培养条件和生长因子等要求较低，故更适于大规模工业化生产的需要。二、生产用动物细胞的要求和获得二、常用生产用动物细胞的特性WI-38：二倍体细胞系。该细胞是最早被认为是安全的传代细胞。在20世纪60年代广泛用

7、于制备疫苗。MRC-5:二倍体细胞系。被广泛用于人体疫苗的生产。CHO-KI:1957年从中国地鼠暖巢中分离的一株上皮样细胞，培养时需要加入脯氨酸。当前被广泛用于构建工程菌的是一株缺乏二氢叶酸还原酶的营养缺陷突变株CHO-dhfr-。二、生产用动物细胞的要求和获得二、常用生产用动物细胞的特性BHK-2：二倍体细胞系。用于增值病毒和工程细胞的构建。Vero:贴壁依赖型的成纤维细胞。支持多种病毒的增值，已被批准用于人体。Namalwa:转化细胞系。被大规模地用于生物素α干扰素。SP2