《动物细胞制药pa》PPT课件.ppt

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1、动物细胞的培养条件年份技术发展概要1907年Harrison创立体外组织培养法1951年Earle等开发了能促进动物细胞体外培养的培养基1957年Graff用灌注培养法创造了悬浮细胞史上绝无仅有的1×1010~2×1010cells/L的记录，标志着现代灌注概念的诞生。1962年Capstil成功地大规模悬浮培养小鼠肾细胞（BHK），标志着动物细胞大规模培养技术的起步。1967年VanWezel用DEAE-SephadexA50为载体培养动物细胞获得成功。1975年Kohler和Milstein成功地

2、融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。1986年DemoBiotech公司首次用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞生产单抗获得成功。1989年Konstantinovti首次提出大规模细胞培养过程中的生理状态控制，更新了传统细胞培养工艺中优化控制之理论。名称价格（USD/kg）用途长春新碱≦1000000抗肿瘤药物长春花碱≦3500000抗肿瘤药物保加利亚玫瑰油2000-3000香料、调味品毛地黄毒苷3000心机能障碍辅酶Q-10600强心剂可待因650麻醉剂、镇痛剂紫

3、草宁4000消炎、抗菌、染料苦橙花油1125香料吗啡600麻醉剂、镇痛药当归根油800香料、中药春黄菊油500香料、药物茉莉500-2000香料动物细胞培养细胞培养是指离体细胞在无菌条件下分裂、生长，在整个培养过程中不出现分化，不再形成组织。组织培养是指动物体系的某种组织，在体外培养时细胞一直保持原来已分化的特征，该组织的结构和功能持续不发生明显变化。原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。传代培养或再培养是转移部分初代培养物到新鲜培养基中的培养。动物细胞培养与微生物培养区别动

4、物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物附着在固体或半固体的表面才能生长。对营养的要求较高，往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、激素和生长因子等，其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10%的胎牛或新生牛血清。动物细胞对环境敏感，包括pH、溶氧、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的检测和控制。动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。不仅需要严格的防污染措施，同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供养和调节pH。原代培养：单个细胞十代左右传代培养：原代培养细胞

5、40~50代左右细胞株：10到40、50代的细胞遗传物质没发生改变细胞系：超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增值注意界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系已有商品市售无血清培养基主要游戏书3类：基本合成培养基；基本合成培养基加生长因子；基本合成培养基加组织抽提物。动物细胞培养方法和操作方式一、动物细胞大规模培养方法依细胞种类：原代培养传代培养依培养基：液体培养基固体培养基依培养器和方式：静止培养、旋转培养搅拌培养、为载体培养中空纤维培养、固定床或流化床培养从生产实际分为：悬浮培养贴壁培养贴壁-

6、悬浮培养培养技术动物细胞大规模培养与实验室培养相比，培养条件更严格，控制难度更大，其培养方法可概括为：悬浮培养固定化培养微载体（Microcarrier）培养法培养技术一、单层静置贴壁培养法：转管及转瓶培养和旋转圆柱管培养二、悬浮培养法：⑴翻滚培养⑵旋转培养⑶电磁搅拌培养⑷振荡培养⑸振动器培养⑹滋养器装置⑺发酵罐培养（包括搅拌生物反应器和气动发酵器培养）三、固定化培养法：㈠多层培养：1.多层繁殖期；2.多层托盘式装置；3Optical培养系统；4.塑料软片培养系统；5.Heli-cel薄膜卷带式培养㈡

7、微载体培养㈢中空纤维灌注培养法㈣玻璃珠床培养㈤包被细胞培养（如图）培养技术细胞大量培养的类型和方法一、大规模培养系统的类型批量换液半连续批量培养系统用连续灌注法连续-流动培养系统（如图23-3）培养技术细胞大量培养的类型和方法二、大规模生产细胞的方法㈠单层静置贴壁培养法：Roux瓶/方瓶转管及转瓶培养旋转圆柱管培养培养技术细胞大量培养的类型和方法二、大规模生产细胞的方法㈡固定化培养法：将细胞限制或定位于特定空间位置的培养技术称为细胞固定化培养。多层培养法⑴多层繁殖器在玻璃圆管中(大方缸）有多层玻璃隔板

8、支持细胞贴附生长。⑵钛碟装置多层圆柱状不锈钢（带有观察条件）罐内或玻璃瓶内装入钛碟圆盘支持细胞贴服生长。可改变位置和旋转。培养技术细胞悬浮培养法动物细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方法谓之悬浮培养法。其培养方式有批量法半连续法连续法适用于培养确立细胞株、杂交瘤细胞、肿瘤细胞、血液细胞及淋巴组织细胞，用于大量生产疫苗、α-干扰素、白介素等药品。此法不适于包括二倍体细胞在内的正常组织细胞的培养。培养技术细胞悬浮培养法的优点可连续收集部分细胞进行移植继代