介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用

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1、介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用赵莉琳1，刘阳2△（1、重庆医科大学附属第一医院口腔科400016；2、重庆医科大学附属第二医院耳鼻咽喉－头颈外科400010）摘要:目的：本研究采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素的功能进行体外研究，以阐明短发夹RNA重组腺病毒可以影响NK-92细胞中穿孔素的表达。以期为深入研究穿孔素的作用机制奠定基础方法：构建腺病毒介导的穿孔素shRNA，在mRNA和蛋白水平验证所构建的重组腺病毒的有效性，最后通过转染Ad-shPFP对NK-92细胞穿孔素蛋白表达水平产生影响。结果：转染pShuttle-Scramble和以期为深入pShutt

2、le-shPFP1～3的干扰效率分别为(4.4±1.2)%，(74.2±4.1)%，(43.2±3.2)%和(61.7±2.6)%。干扰组与对照组的差异明显，其中又以pShuttle-shPFP1的干扰效果最佳。RT-PCR检测mRNA表达：Ad-shPFP1处理组的mRNA与之相比值为0.32，表明在腺病毒介导下，shRNA使得NK-92细胞中穿孔素mRNA水平减少。westernblot免疫印迹分析，用Ad-shPFP1处理后可在蛋白水平上明显抑制穿孔素基因的表达。结论：穿孔素短发夹RNA重组腺病毒可以在mRNA和蛋白水平抑制NK-92细胞中穿孔素的表达。建议修改中英文摘要，特别

3、是在英文摘要的措辞和语句通顺方面！关键词：穿孔素腺病毒NK细胞短发夹RNARecombinantAdenovirusmediateRNAsilencingofperforininNK-92cellsanditsbiologicaleffectsZHAOLi-lin1,LiuYang2(1TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversityDental2SecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversityOtolaryngology-HeadandNeckSurgeryChong

4、qing400015)Abstract:ObjectiveInthisstudy,adenovirus-mediatedRNAitechnologywasapplicatedonthefunctionofperforininvitrostudies,toelucidatewhetherRecombinantadenoviruscanaffecttheexpressionofPerforininNK-92cells.MethodsConstructedAdenovirus-mediatedperforinshRNA,thevalidityoftheconstructedrecombin

5、antadenoviruswasverificatedatmRNAandproteinlevels.byWiththetransfectionofAd-shPFPonintoNK-92cells,theexpressionofperforinproteinexpressionlevelwasimpacteddetected.ResultsthejammingrateoftransfectionpShuttle-ScrambleandpShuttle-shPFP1～3are(4.4±1.2)%，(74.2±4.1)%，(43.2±3.2)%,(61.7±2.6)%,respective

6、ly.Morover，RT-PCRshowstheratioofAd-shPFP1andpShuttle-shPFP1is0.32.FurthermoreWesternblotshowsafterAd-shPFP1canobviouslyrepressinhibittheexpressionofPerforin.ConclusionsRecombinantadenoviruswithperforinshRNAcanrepresstheexpressionofPerforininNK-92cells.Keywords:perforin;adenovirus;NKcell;shortha

7、irpinRNA作者简介：赵莉琳，女，硕士，联系电话：13108987168。E-mail:zhaolilin263.163.com△通讯作者获得性免疫相关的细胞毒性T淋巴细胞(CytotoxicTLymphocytes）和NK细胞（NaturalKillercells）介导的细胞杀伤对清除肿瘤清除和病毒感染细胞清除起着至关重要的作用[1]。其中，穿孔素/颗粒酶通路又扮演着重要角色[2]。在人的CTL和NK细胞中一共有5种颗粒酶（分别是A,B,K,M,H）