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《比色法测定Fenton反应产生的羟自由基》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、184生物化学与生物物理进展呢···199..,:strseaneeo:estann1975AbactA而IPlNdonmialiig1一4methodforisozyme15deseribed.FilterPaPer,,,3PierreEIbethAAlldrewDHPlantPhysiolW圈W.(teratedwith04%昭ae)waskedin1986:82,753osrsoaiynlestainisolutionforhalfanhourandsoz飞,,wasusedtostaintheisozymesafterPAGEthenASimPleEeoniea
2、landSPeeiifeS妞iningometeeaneraeroaereastc.hgldfiltPPtdPliMethdoforIsozymesinPAGEYagnKaivmovcox.esaeouenertannstuter0rasu,Thtinitimwldbfogh(IitofCPeGmPlmResobo眼cesrnoa.tersta,utteanterneereutuen,lini眼phgeldfilhCiesAcad阴yofAgilercSicemrfAn,na;anonPaPerintofixingsolutionander刀novethefilter及
3、ijig100081Chi)ShgZhglina.eartent,raPPerwithtweezesrearely(DPmofBiolgo)eHbe￡Nomlful,,.eo5zesecestan,auang,naKyw川isoymPAGEpifiinignUivesriythSijihz050016Chi)method比色法测定Fotnen反应产生的经自由基贾之慎部建敏唐孟成(浙江农业大学无机及分析化学教研室,杭州310029),一,摘要Fenton反应产生的轻自由基能与水杨酸生成经基化产物23二经基苯甲酸用比色法测定其含量能间接测定经自由基的生成量.通过对测定条件的
4、研究,得到最佳的测定方案.可作为一种简便.的筛选轻自由基清除剂的方法关键词经自由基,Fenn,,ot反应比色法水杨酸,,在生物体内需氧代谢的氧化还原反应所水杨酸用比色法测定其经基化产物2,.,一—产生的轻自由基可以引发不饱和脂肪酸发生3二经基苯甲酸此法已应用于测定次黄嗦,.一”、一脂质过氧化友应并损伤膜结构及功能川吟黄嚓吟体系〔〕还原型谷胧甘肤过氧化氢、一体系〔6〕烟酞胺嗦吟磷酸二核昔酸过氧化氢经自由基的检测对于自由基的生物作用研究有重要意义.体系v[]、抗坏血酸一过氧化氢体系〔“〕以及水的,.在研究自由基时反应体系可通过水的辐辐射体系[9〕产生的经自由基、,-解光解以
5、及化学反应来产生轻自由基Fen本文研究了通过比色法测定水杨酸经基化n,ot反应是最常见的化学反应[2〕总反应可用n产物来测定Fenot反应产生的经自由基的实:.下式表示验条件·eZ++Ze3++一+FHqFOHOH一1材料和方法eFnton反应产生的经自由基通常通过气,相色谱法和电子自旋共振捕集技术测定3[]1.1试剂和仪器、,但因仪器昂贵操作也较复杂一般实验室难芦丁(生化试剂,上海试剂二厂出品),.,以进行懈皮素(色谱纯lFukaChemieAG公司出经自由基易攻击芳环化合物产生经基化合,Halliwell[4]:一一,:一物提出了在轻自由基体系中加入收稿日期1995
6、0630修回日期1995l一20;生物化学与生物9物9理进展吃BB品,其余均为分析纯试剂.试剂用去离子水中,将.%三乙醚蒸发至干加入10氯乙酸..,.,.配制7015ml10%025ml05%NaN21分光光度计(上海第三分析仪器厂钨酸钠q.(每天配置).25ml,5min,制造)0放置后加入1.21l/.25ml,4方法moLKOH0滴加去离子水至耐..,,。.121:混匀510nm处测定其吸光A经自由基的产生在10iln刻度具塞处于度试管中加入10ol/L水杨酸0.sml,1.2.3:1.2.1mm轻自由基清除率的测定在的..,,..o04ml/LpH74的磷酸缓冲
7、液3ml体系中加入一定量的清除剂按122的方法3.8ml/L1)的.5ml,As,.moeF(EDTA溶液0测定吸光度按下式计算,。s加入4mmol/L的玩qlml启动反应于A一A=X100%25℃恒温水浴中放置90in.清除率A。m..122经自由基的测定:加6l/LHCI结mo2结果与讨论,.,a束反应再加入059NCI滴加去离子水至.6而,混匀.加入冷的乙醚4ml,充21水杨酸浓度的影响刻度处,,加入不同体积的10mmol/L水杨酸测分混匀静置后移取上层乙醚3ml于10ml.刻度离心管中.将离心管置于40℃恒温水浴得吸光度见表1·表
