《液相色谱法》PPT课件(I)

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1、4、高效液相色谱法平时作业（30%）：文献报告内容要求：现代分离技术在实际生产和分析检测中的应用新技术或者新应用，体现当前技术进展例超临界流体萃取技术在油脂化工中的应用离子交换树脂在废水处理中的应用至少3页A4纸，纸质版10.25交齐，电子版(小于3M)发至邮箱sampsonzhang12@gmail.com2344.1.1特点特点：高压、高效、高速、高灵敏度高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。54.1.2.流程674.1.3.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10m），液体的

2、流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性8(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。9梯度洗脱梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调整混合样品中各组分的k值，使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、pH值和离子强

3、度来实现的，而不是借改变温度（温度程序）来达到。10流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：(3)进样装置11(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管，柱内壁要求精细抛光。内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。12(5)液相色谱检测器a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围宽；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。13光电二极管阵列1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图

4、，如图所示。14c.示差折光检测器除紫外检测器之外应用最多的检测器；通用型每种物质具有不同的折光指数；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值差值与浓度呈正比。缺点：灵敏度较低，检出下限为10-7g/mL；易受温度和流速的影响；不能进行梯度洗脱。15d.荧光检测器高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；激光诱导荧光(LIF)LaserInducedFluorescence体积小，适合毛细管柱需用衍生法制备衍生物，其衍生法分为柱前与柱后衍生两种，常用邻苯二甲醛或异氰硫基苯为衍生化试剂16紫外检测器

5、荧光检测器示差折光检测器17安培检测器电导检测器库仑检测器介电常数检测器极谱检测器e.电学和电化学检测器：18191.流动相特性（a）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；（b）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。正相色谱法主要靠组分的极性差别分离，适用于含有不同官能团物质的分离。（c）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。极性小的组分后出柱，主要分离对象是极性小的物质（6）液相色谱流动相202.流动相类别按流动相组成

6、分：单组分和多组分；按极性分：极性、弱极性、非极性；按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。213.流动相选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙

7、醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)224.选择流动相时应注意的几个问题（a）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（b）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。（如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。）（c）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（d）流动相还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。234.2.1.液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromato