新鱼腥草素钠对鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响

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1、万方数据动物医学进展。2008，29(2)：2l一23ProgressinVeterinaryMedicine新鱼腥草素钠对鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响李萍1，朱善元孙，成大荣3，陆广富2，贾宁1(1．甘肃农业大学．甘肃兰州730070；2．江苏畜牧兽医职业技术学院．江苏泰州225300；3．扬州大学兽医学院．江苏扬州225009)摘要：采集健康鸡肝素抗凝血，按常规方法分离外周血淋巴细胞并于体外培养24h后，加入不同剂量的新鱼腥草素钠／刀豆素A(ConA)，继续培养44h后，以MTT法测定新鱼腥草素钠

2、对淋巴细胞增殖的影响。结果表明，新鱼腥草素钠在体外具有刺激淋巴细胞增殖的能力，且与ConA具有协同作用；进一步分析表明，不同给药剂量的新鱼腥草素钠对淋巴细胞的影响不同，其中以终浓度为250mg／L效果最明显。关键词：新鱼腥草素钠；淋巴细胞；鸡中图分类号：$859．79；$852．4文献标识码：A文章编号：1007-5038(2008)02—0021—03新鱼腥草素钠(Sodiumnewhoutluyfonate，SNH)是一种人工合成的鱼腥草素类似物，具有与鱼腥草挥发油、合成鱼腥草素相似的药理作用，对

3、提高机体的免疫力、感染性疾病的预防和治疗有着重要意义[1]。目前，关于鱼腥草和合成鱼腥草素的报道，多集中在其广谱抗菌、抗病毒以及抗炎镇痛等作用的研究；关于其对家禽免疫功能的影响及在养禽业中应用的，尚未见详细报道。本试验采用MTT法比较了不同浓度新鱼腥草素钠对体外培养的鸡外周血淋巴细胞增殖的影响作用，并筛选出效果最佳的药物浓度，从而为后续体内试验确定药物剂量提供参考依据，为探讨新鱼腥草素钠免疫增强作用和机理奠定基础。1材料与方法1．1材料1．1．1新鱼腥草素钠注射液江苏动物药品工程技术研究中心制备，规格

4、10mL(20mg)。1．1．2主要试剂青霉素钠为哈药集团制药总厂产品，硫酸链霉素为华北制药股份有限公司产品，RPMI一1640培养液为Gibco公司产品，新生牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品，刀豆素A(coneanavalinA，ConA)、噻唑蓝(thiazolylblue，MTT)为Sigma公司分装产品，淋巴细胞分离液为上海华精生物高科技有限公司产品，二甲基亚枫(dimethylsulphoxide，DMS0)为上海生工生物工程技术服务有限公司产品，无钙镁Hanks液为本实验室配制。1．

5、1．3主要仪器MCol5AC型C02培养箱为日本SANYO公司产品，PM-6型倒置显微镜为日本Olympus公司产品，At一838型自动酶标分析仪为上海安泰分析仪器有限公司产品，细胞培养板为美国Corning公司产品。1．2方法1．2．1外周血淋巴细胞的制备取50日龄健康鸡购自江苏省家禽科学研究所，通过心脏采集肝素抗凝血5mL，制备淋巴细胞[2]。用含有100单位／mL青链霉素、100mL／L新生牛血清的RPMI一1640培养液调整细胞密度至1×107个／mL后，转入细胞培养瓶并于39．5℃、体积分数

6、为5％的CO：培养箱中培养24h。1．2．2外周血淋巴细胞增殖反应待上述细胞生长至单层后，去除培养上清，用等量的新鲜培养液悬浮细胞，并分装于96孔细胞培养板中(80弘L／孔)。按照表1加入不同剂量的新鱼腥草素钠／ConA(终浓度5mg／L)至总体积为200“L；同一剂量的试验组共设置12个重复孔，并设立不同的对照(表1)。将细胞放人39．5℃、体积分数为5％的CO。培养箱中继续培养44h。取出细胞板，每孔加入20“LMTT液(以RPMI一1640培养液配成5g／L)；继续培养4h后，弃去培养孔中的上清

7、液，每孔加入100扯LDMSO，充分混匀；于室温避光静置15min后，测定570nm波长的吸光值(OD。，。)，并计算平均值，作为T淋巴细胞增殖的指标‘¨]。收稿日期：2007—10-30基金项目：江苏省自然科学基金(BK2006085)作者简介：李萍(1981一)．女．河南安阳人．硕士研究生．主要从事兽医痛理免疫学研究．*通讯作者万方数据22动物医学进展2008年第29卷第2期(总第174期)表1试验分组殛加药方法Table1Groupingandtreatmentoftheteat组别Groups

8、SNH终浓度／(mg·L一1)ConA终浓度／(mg·L1)FinalconcentrationFinalconcentrationofSNHofConA试验组ⅡExperimentalgroupII试验组ⅢExperimentalgroupm对照组Controlgroup1．2．3数据分析所得数据用“平均值士标准差”表示，通过t检验比较各组间的统计学差异。2结果2．1SNH对淋巴细胞增殖的影响在试验组I，单独使用SNH进行的MTT试验的OD。，。值均高