松花粉对砷中毒大鼠外周血t淋巴细胞rdna转录活性的影响

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1、松花粉对砷中毒大鼠外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的影响：罗艳红，黄晓敏，龚厚文，韦文龙，陆兰芬，韦玉脉，韦耀东【摘要】目的通过研究松花粉对砷中毒大鼠的外周血rDNA转录活性的影响来检测松花粉对砷中毒大鼠免疫功能的调节作用。方法将54只SD大鼠随机分为3组。正常对照组饮用蒸馏水；治疗组、中毒对照组均隔天注射NaAsO2（8mg/kg）进行砷染毒，治疗组在砷染毒进行的第15天后开始用松花粉灌胃（6.25g/kg）。至第45天，分别测各组外周血中T淋巴细胞rDNA转录活性。结果中毒对照组与治疗组相比rDNA转录活性显著降低（P<0.01）；中毒对照组与正常对照组相比，rDNA转

2、录活性极显著降低（P<0.01）。结论松花粉能提高砷中毒后大鼠rDNA转录活性，即提高其免疫力。【关键词】松花粉；砷中毒；大鼠；动物实验；DNA；转录；T淋巴细胞Abstract:ObjectiveToexploretheimmunologicregulationabilityofPinePollenonarsenic(As)poisoningratbymearsuringtherDNAtranscriptionactivityofperipheralbloodlymphocyte.Methods54experimentalratslydividedintothreegro

3、ups:GroupA(thenormalgroup),GroupB(thetreatedgroup)andGroupC(thepoisonedgroup).Frombeginning,thenormalgroupinistratedg/kgeveryotherday.15dayslater,thetreatedgroupinistratedphocyteofthe3groupsmunity.Keyalexperiment;DNA;transcription;T-lymphocytes现已知道，T淋巴细胞在机体抗肿瘤免疫应答过程中，处于关键地位。肿瘤的形成一方面是由于机体免疫功能下

4、降或瘤细胞的发生超出免疫监视和免疫清除；另一方面，肿瘤血清中出现的抑制性细胞因子使T淋巴细胞核中和核糖核蛋白体脱氧核糖核酸rDNA的转录活性下降，进而抑制了机体的免疫功能［1］。由于肿瘤机体的免疫功能状态随着肿瘤的不断生长而进行性下降，其各种特异性和非特异性的细胞免疫与体液免疫均受到显著的抑制。而我们知道砷中毒可以导致肿瘤发生，因此，对砷中毒大鼠免疫功能状态的准确评估有重要意义。rDNA转录活性可评估机体的免疫状态［2］，另外，它也可以作为判断细胞耐药指标之一［3］。松花粉的排砷、保护机体方面的作用已有研究［4］，笔者现通过测定外周血rDNA转录活性的高低来评判其能否提高砷中毒大

5、鼠的免疫力。本次研究采用CIAS-1000型细胞图像分析系统，从基因转录水平上定量分析砷中毒大鼠以及松花粉治疗组外周血T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白（Argyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORs），以银染面积与细胞核面积比（I.S%）作为Ag-NORs检测指标，反映T淋巴细胞核内rDNA的转录活性，对免疫功能状态进行分析，为砷中毒大鼠的预后评估提供科学的依据。　　1材料与方法　　1.1试剂　　NaAsO2，分析纯，购自上海试剂总厂第四分厂；T淋巴细胞rDNA转录活性分析试剂购自广州康立得医疗科技有限公司。　　1.2药品　　

6、国珍松花粉购自中国新时代公司。　　1.3动物分组　　雌性SD大鼠54只（购于广西医科大学实验动物部），均为12周龄，体重160g左右，普通（清洁）级。将大鼠分为3组，每组18只。　　1.4染毒和治疗　　正常对照组，自行饮用蒸馏水；治疗组，中毒对照组为中毒组，用亚砷酸钠染毒，8mg/kg体重隔天腹腔注射。15天后，治疗组的大鼠用国珍松花粉（6.25g/kg体重）持续灌胃治疗，至第45天处理各组动物。　　1.5采样和检测方法及仪器　　剪颈动脉，取血0.5ml，肝素抗凝，加入4ml培养液含有PHA的密闭培养瓶中，置37℃培养箱72h，每24h摇匀1次。将培养的细胞悬液离心收集细胞。经低

7、渗溶液破坏红细胞，固定液固定细胞后，80℃～90℃下银染。每组至少做3个片子，具体操作方法见T淋巴细胞快速染色试剂盒说明书。上CIAS-1000型细胞图像分析系统（广州康立得医疗科技有限公司生产），于40倍显微镜下采集图像，每片计算10个T淋巴细胞核仁银染面积与细胞核仁面积比值（I.S%）。　　1.6统计方法　　采用方差分析及t检验进行统计学处理。　　2结果T淋巴细胞I.S%测定结果，中毒对照组最低，治疗组最高，见表1。表13组大鼠T淋巴细胞I.S%的测定(略)　　3讨论砷中毒后