人肺腺癌多药耐药细胞系a549 2fcddp的建立及相关基因表达检测

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1、华中科技大学硕士学位论文人肺腺癌多药耐药细胞系A549/cDDP的建立及相关基因表达检测姓名：赵伟刚申请学位级别：硕士专业：外科学（胸外科）指导教师：潘永成20090528华中科技大学硕士学位论文人肺腺癌多药耐药细胞系A549/cDDP的建立及相关基因表达检测华中科技大学同济医学院附属协和医院胸外科研究生赵伟刚导师潘永成王建军副教授教授中文摘要目的：本研究旨在建立人肺癌多药耐药细胞系，研究其耐药特性和机制。方法：应用人肺腺癌细胞株A549，采用顺铂（cDDP）大剂量间歇诱导法，建立多药耐药细胞系A549/cDDP。相差显微镜观察细胞形态和结构差异，绘制两种细胞的体外生长曲

2、线。用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性，采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多耐药基因（MDR）的表达产物P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）及谷胱甘肽硫转移系统（GSH/GST）的表达情况，应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。结论：建立的A549/cDDP具有明确的多药耐药性，其多药耐药基因MDR及MRPmRNA表达升高。关键词：人肺腺癌；多药耐药；基因表达2华中科技大学硕士学位论文AbstractObjectiveIthasbeenproventhatchemotherapyfailurecausedbymultidrugresi

3、stanceinlungtumorcellsisthemainreasoninfluencesthepatient’ssurvivalrate.Theaimofthestudyistoestablishamultidrugresistancecelllineofhumanlungadenocarcinomaandstudythemechanismofmultidrugresistance．MethodsHumanlungadenocarcinomacelllineA549wasinducedtomultidrugresistancecelllineA549/cDDPbyi

4、ntermittentadministrationofhighdoseofcisplatin(cDDP)．ThemultidrugresistancewasdetectedbyusingMTTassay．Theexpressionsofmdr-1gene-codedP-glycoportein(P-gP)，multidrugresistance-associatedprotein(MRP),andGSH／GSTwereexaminedbyflowcytometricassay．TheexpressionsofMDRandMRPgenewerealsodetectedusi

5、ngRT—PCRinbothA549/cDDPandA549celllines.ResultsA549/cDDPwasresistanttomanyanti—tumoragents．TheIC50ofA549/cDDPwas16.87timeshigherthanthatofA549．It’sexpressionsofP-gPandMRPwereincreasedsignificantlyto(70.5±4.9)％and(29.4±2.9)，respectively，3华中科技大学硕士学位论文whilethoseofA549wereonly(42.4±5.6)and(21

6、.4±3.5)，respectively．TherewasnodifferenceoftheGSH／GSTexpressionbetweenA549/DDPandA549cells．ConclusionA549/cDDPisamodelwithmultidrugresistanceandthelevelsofMDRandMRPmRNAexpressionsarehigherinA549/cDDPthanthoseinA549.Keywordshumanlungadenocarcinoma；multidrugresistance；geneexpression4独创性声明本人

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