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1、人腺样囊性癌多药耐药细胞系的建立论文周晓冬宋国祥隋志方畅继武【摘要】目的：建立人腺样囊性癌耐药细胞系，为阐明腺样囊性癌的多药耐药机制及逆转耐药提供模型及研究依据。方法：以长春新碱（VCR）为诱导剂，通过浓度递增间断刺激法对人腺样囊性癌细胞系（ACC）进行体外诱导耐药，建立耐VCR的腺样囊性癌细胞系ACC/VCR。细胞计数法绘制细胞生长曲线，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞对化疗药物敏感性。结果：ACC经体外诱导后，ACC/VCR细胞对长春新碱（VCR）、阿霉素（ADM）和平阳霉素（PYM）的耐药性明显增强，具有交叉耐药，对环磷酰胺（CTX）、氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂（
2、DDP）耐药性无明显变化。耐药前后ACC细胞的生长曲线、群体倍增时间和光镜下的形态无明显改变。结论：VCR可诱导腺样囊性癌细胞产生多药耐药。【关键词】腺样囊性癌多药耐药长春新碱EstablishmentofmultidrugcelllineofhumanadenoidcysticcarcinomaAbstractAIM:Toestablishaninvitroresistancemodelofadenoidcysticcarcinomaationforelucidatingthemechanismsofmultidrugresistance(MDR),improvin
3、gthechemotherapyscheme,evaluatingtheprognosisandreservingtheMDRinadenoidcysticcarcinoma.METHODS:Theresistancecellline,ACC/VCR,entofadenoidcysticcarcinoma.Thegroycine(ADM)andpingyangmycin(PYM),butnotresistanttoCyclophosphamide(CTX),fluorouracil(5-FU)andcisplatin(DDP).Thereeandmorphologic
4、alchangesbeta.·KEYDR)3。多药耐药的产生是导致肿瘤产生耐药和化疗失败的重要原因之一。我们通过长春新碱诱导建立腺样囊性癌耐药细胞系，旨在为阐明腺样囊性癌的多药耐药机制，指导多药耐药逆转剂的研究提供模型和研究依据。1材料和方法1.1材料人腺样囊性癌(ACC)细胞系购自上海申能博彩公司。RPMI1640干粉培养基(Gibco公司),胎牛血清(天津灏阳生物有限公司，56℃40min灭活补体),青、链霉素(石家庄制药厂),谷氨酰胺（L-glutamina）(Gibco公司)，胰蛋白酶(Sigma公司),依地酸二钠（EDTA）(广州化学试剂厂),二甲基亚砜（D
5、MSO）(北京鼎国生物有限公司),噻唑蓝（MTT）(北京鼎国生物有限公司),长春新碱（vincristine,VCR）(上海华联制药有限公司),环磷酰胺(CTX)(上海华联制药有限公司),阿霉素(adriamycin,ADM)(深圳万乐药业有限公司),氟尿嘧啶(5-FU)(天津市氨基酸公司人民制药厂),平阳霉素(PYM)(天津太河制药有限公司)，顺铂(DDP)(山东齐鲁制药厂)。CO2培养箱（Heraeus，德国），倒置显微镜（Olympus-1M，日本），生物显微镜（OlympusBH-2，日本），紫外分光光度计（UV754，上海分析仪器厂），台式高速离心机（All
6、egra64R，美国Beckman），磁力搅拌器（江苏省金坛市通济仪器厂），酶联仪（DG-3022A，南京电子管厂）。1.2方法ACC细胞系培养在含100ml/L灭活胎牛血清、100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养液中。培养条件：37℃，50ml/LCO2，每3d换液1次，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化传代，约5d传代1次。采用VCR浓度递增间断刺激法选择耐药细胞，具体步骤如下：VCR15μg/L×7d，去药7d，VCR30μg/L×7d，去药7d，VCR60μg/L×7d，去药7d，VCR60μg/L×7d，去药7d，VCR120μg/L×7d，
7、去药7d，VCR120μg/L×7d，去药7d，VCR250μg/L×7d，去药7d，VCR250μg/L×7d，去药7d，无药培养7d后进行实验。取生长状态良好的细胞，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化制成细胞悬液，计数，将细胞悬液接种于24孔板，每孔1mL，接种浓度1×107/L，37℃，50ml/LCO2培养。每日取3孔板细胞进行计数，计算均值。连续观察7d，其间培养3d后给未计数的细胞换液。以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），在半对数坐标纸上绘制生长曲线，根据公式计算细胞在对数生长期的倍增时间。TD(倍增时间)=t（培养时间h）×
