盐酸克伦特罗酶联检测试剂盒使用说明书

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1、恩诺沙星酶联免疫检测试剂盒使用说明书1.用途恩诺沙星，是喹诺酮类抗菌药，因其能抑制细菌DNA螺旋酶，抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强，已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促进生长。但由于其耐药性和潜在的致癌性，欧盟、日本及我国均制定了在组织中的最高残留限量为100ppb。目前对恩诺沙星的检测方法主要有荧光分光光度法、酶联法（ELISA）和液相色谱法等。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、不需要贵重仪器和样本前处理相对简单等优点，适于现场监控和大量样本筛查。本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测鸡肉、鱼、虾等中恩诺沙星的含量。2.测定

2、原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被恩诺沙星卵清蛋白的偶联物。检测时，加入恩诺沙星标准品或待测样品溶液及特异性的抗恩诺沙星抗体，包被在微孔板上的恩诺沙星蛋白偶联物和标准品或样品中的恩诺沙星竞争性地与抗体结合。再加入酶标二抗,形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的恩诺沙星浓度与吸收光强度成反比，与标准曲线比较即可得出相应残留物恩诺沙星的含量。3.试剂盒组成（1）酶标板(已包被恩诺沙星卵清蛋白偶联物的微量反应板):1块（8孔X12条）。（2）恩诺沙

3、星标准液:6瓶（1ml/瓶），浓度分别为0、0.5ng/ml、1.5ng/ml、4.5ng/ml、13.5ng/ml、40.5ng/ml（3）浓缩酶结合物(羊抗鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物溶液):1瓶（10倍,1.6ml）（4）浓缩抗体：1瓶（10倍,0.8ml）（5）显色剂A：1瓶（8ml）（6）显色剂B：1瓶（8ml）（7）终止液：1瓶（8ml）（8）浓缩洗涤液：1瓶（10倍,50ml/瓶）,用于浓缩酶结合物和浓缩抗体的稀释以及微孔板的洗涤（9）使用说明书：1份。4.需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备…均质器…天平，精度1mg…15ml、50ml塑料离心管…5

4、、10ml刻度移液管…振荡器…恒温水浴锅…离心机…氮吹仪或旋转蒸发仪…恒温箱1深圳市易瑞生物技术有限公司Tel：0755-29744527Fax：0755-27948417…微孔板酶标仪(450nm)…20μl,200μl,1000μl，八道100或200μl移液枪（2）试剂…二氯甲烷…双蒸水…正己烷…乙腈…0.1MNaOH溶液：0.4gNaOH溶于100ml双蒸水…PB缓冲液：0.52gNa2HPO4,0.088gNaH2PO4溶于100ml双蒸水5.注意事项（1）终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。（2）不要使用过了有效日期的恩诺沙星检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试

5、剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。（3）0标准液的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。（4）显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。6.储存条件（1）2-8℃保存，切勿冷冻。（2）将不用的酶标板放进原袋中重新密封。（3）酶结合物和显色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7.样品处理样品处理：鱼、虾和鸡肉：(1)鱼虾、鸡肉等去皮、脂肪，用均质器均质样本，称取2±0.05g均质物，加入15ml离心管;(2)加入5ml乙腈，1ml0.1MNaOH，充分混合10min，3000转/分以上，离心10min;(3)取出4ml上清液，加入PB缓冲液2ml，混合均匀；(4)加

6、入二氯甲烷5ml，充分混匀10min，3000转/分以上，离心10min。去上层，取下层有机相4ml到15ml离心管中（清亮无杂质）；(5)50℃用氮气吹干；(6)0.5mlPB缓冲液溶解干燥的残留物，加入正己烷1ml混合2min，3000转/分以上，离心5min。(7)取下层50ul溶液。样本稀释倍数1倍。8.免疫分析时试剂的准备注意事项a)使用之前将所需试剂在室温放置至少半小时,让温度回升至室温，特别是测试板孔、稀释抗体的洗涤液、稀释浓缩酶结合物的洗涤液、标准品溶液、样品液等。b)使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。2深圳市易瑞生物技术有限公司Tel：0755-2974

7、4527Fax：0755-27948417c)在使用中不要让微孔干燥。d)在EIA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。e)在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用膜盖住微孔板。（1）配制洗涤液:浓缩洗涤液为浓缩10倍的溶液，使用前应根据所需量进行10倍稀释，即按1ml浓缩洗涤液加入9ml蒸馏水的比例进行稀释。（2）配制恩诺沙星抗体应用液：提供的恩诺沙星抗体为浓缩液。按照1：10稀释（1μl浓缩抗体加9μl洗涤液）。在吸取浓缩液之前，要仔细地摇动，剩余的放置