盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发

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1、摘要盐酸克伦特罗（CL）是ß-兴奋剂的一种，具有促进动物生长，提高饲料利用率，改善瘦肉率的作用。但该药排泄速率慢，易蓄积在动物组织中，引起消费者发生急性中毒，目前已被大多数国家列为违禁药，然而，CL滥用和残留的问题仍然存在，灵敏、有效的残留检测方法是控制残留的基本手段。目前国际上多使用ELISA方法作为CL快速检测的筛选方法，国内检测机构一般采用进口试剂盒进行检测，成本高，到货周期长，售后没有保证，但是在这一领域的国产试剂盒产品又存在着稳定性差，假阴性、假阳性率高等缺点，从而使国产试剂盒在这方面迟迟未打开市场。本实验着力于研

2、制出稳定性好，假阴/阳性率低，能够与国外产品相媲美的CL快速检测试剂盒。本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，通过优化条件得到最终反应条件为：包被抗原约0.2µg/mL，抗体工作浓度约为0.059µg/mL，总体反应时间为90min，酶标二抗的稀释倍数为1：1000。建立的标准曲线的线性范围为0-8ng/mL，IC50平均为1.0ng/mL，最低检测限（LOD）达0.1ng/mL，标准点批内变异系数为1.28-13.19%，批间变异系数在5-15%之间，试剂盒保存期在1年以上。与荷兰（ED）试剂盒比对实验表明，本试剂盒的回收率

3、在80%-120%之间，高于ED试剂盒的50%-80%的样品回收率，同时本试剂盒可以保持稳定1年以上，这与ED试剂盒相当，领先于国内试剂盒。总之，在标准点符合程度、曲线参数、实际样品回收率等方面与ED试剂盒的测量结果相当，部分指标甚至优于ED试剂盒，从而证明了本试剂盒的可用性和替代国外试剂盒的可能性。关键词：盐酸克伦特罗，间接竞争ELISA，条件优化，试剂盒，保护剂，回收率IAbstractClenbuterol（CL）isaß-agonistregisteredasaveterinarybronchospasmolytic

4、druginsomecountries.ItwaswellknownthatCLcanbeusedasagrowth-promotingandrepartitioningagentinseverallivestockspeciesatcomparativelyhighdoses,asitcanimproveleanmeatdepositionandproductionefficiency.However,therehavebeenseveralreportedincidencesresultedfromconsumption

5、ofCL-tainededibletissuesofbovineandswine.Itsuseasafeedadditivehasbeenbannedwithinmostcountries.ItisnecessarytodevelopasensitiveandapplicableassayforeffectivesurveillanceoftheillicituseofCL.Atpresent,mostcountriesuseELISAasarapidscreenmethodforCL.Testingorganization

6、sinChinaalmostallusetheimportkitsforthetestingwrok.Theimportkitsarehighinpriceandpoorattheaftersaleservice.ThedomestickitsofCLhavethepriceadvantageandcangivegoodaftersaleservice,butthequalityproblemssuchaspoorstability,highfalsepositive/negativeratesetcaresoubiquit

7、ythatthehome-madekitsstillcannottakeplaceoftheimportkits.Thisreseachaimsatdevelopingaself-madekitforCLwhichisofgoodstability,lowfalsepositive/negativeratesandcancomparewiththeimportkits.ThedevelopmentofthiskitbasesontheprincipleofindirectcompetitiveELISA,byconditio

8、noptimization，finalreactionparametersareachieved:theconcentrationofcoatingantigenis0.2µg/mL,thatofantibodyis0.059µg/mL,dilutionrateofIgG-HRPis1：1