共刺激信号ICOSL2fICOS介导Th2极化与HSCs活化效应在血吸虫病肝纤维化形成中的作用

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1、共刺激信号ICOSL/ICOS介导Th2极化与HSCs活化效应在血吸虫病肝纤维化形成中的作用中文摘要中文摘要由于血吸虫虫卵沉积导致的肝脏虫卵肉芽肿病变和继发性肝纤维化被认为是日本血吸虫病的重要病理损伤。研究表明，宿主在感染日本血吸虫的慢性致病过程当中，血吸虫可溶性虫卵抗原（Solubleeggantigen,SEA）介导的Th2极化在肝脏虫卵肉芽肿反应中的调节和诱发继发肝纤维化中发挥关键作用。肝星状细胞（Hepaticstellatecells,HSCs）的活化，使大量的细胞外基质（Extrace

2、llularmatrix,ECM）沉积在肝脏组织内是肝纤维化进程当中的关键环节。本研究中日本血吸虫病实验动物模型分别为：在FVB/NJ小鼠遗传背景的基础上构建的ICOS转基因（ICOStransgenic,ICOS-Tg）小鼠；并将FVB/NJ小鼠作为其野生型对照。探讨ICOSL/ICOS信号对感染宿主Th2型免疫应答、免疫病理及HSCs活化的影响，探究共刺激信号ICOSL/ICOS介导的Th2极化与HSCs的活化效应对日本血吸虫病肝纤维化形成的影响，为开辟能有效的控制肝纤维化的新途径提供坚实的理

3、论依据。本论文研究分四个部分：一、ICOS-Tg小鼠感染血吸虫病变过程中Th2极化相关共刺激分子表达动态变化目的：探讨共刺激信号ICOSL/ICOS在ICOS-Tg小鼠感染日本血吸虫后，对与Th2极化有密切联系的ICOS、CD28、CD154等共刺激分子表达的影响。方法：分别在日本血吸虫感染前0周和感染后4周（早期）、7周（急性病变期）、12周（慢性期），运用流式细胞术分析观察ICOS、CD28、CD154等共刺激+分子在ICOS-Tg及其野生型小鼠脾CD4T淋巴细胞上表达水平动态变化。采用免疫组

4、织化学法体内同期观察感染小鼠不同病期肝脏虫卵肉芽肿周围炎症性侵润细胞上相关共刺激分子表达水平动态变化。+结果：流式数据表明，感染小鼠脾CD4T淋巴细胞上共刺激分子CD28表达水平自感染后4周开始升高（46.51%），感染后7周达到峰值（78.70%），感染后12周有所下降，但表达水平仍维持在较高水平（60.01%）；而共刺激分子ICOS（38.77%）和CD154（30.53%）表达水平自感染后4周开始升高，感染后7周（ICOS:48.10%;CD154:50.74%）、12周（ICOS:57.9

5、0%;CD154：55.00%）仍处于逐渐升I共刺激信号ICOSL/ICOS介导Th2极化与HSCs活化效应在血吸虫病肝纤维化形成中的作用中文摘要高趋势。免疫组织化学体内同期检测发现，共刺激分子ICOS、CD28、CD154在感染小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎症性侵润细胞上的表达水平在感染后7周即处于较高水平（0.551；0.479；0.516,IOD/AOVI），感染后12周仍呈上升趋势（0.662；+0.492；0.576,IOD/AOVI）。并且ICOS、CD28、CD154在ICOS-Tg小鼠脾

6、CD4T淋巴细胞上的表达水平均要高于同时期野生型小鼠（8.36～57.90vs5.51～41.21;27.33～60.01vs22.36～51.43;5.80～55.0vs4.73～41.21,%）；其在肝脏虫卵肉芽肿周围炎症性侵润细胞上的表达水平在感染后7周(0.551vs0.355;0.479vs0.349;0.516vs0.432,IOD/AOVI)、12周（0.662vs0.418;0.492vs0.431;0.576vs0.447,IOD/AOVI）亦高于同时期野生型小鼠。结论：在ICO

7、S-Tg小鼠感染日本血吸虫慢性致病过程当中，与Th2极化密切相关的共刺激分子ICOS、CD28、CD154的表达均呈逐渐上升趋势，特别是ICOS表达更为显著并可能影响相关共刺激分子CD28和CD154的表达。二、ICOS-Tg小鼠感染血吸虫病变过程中共刺激信号ICOSL/ICOS对宿主Th2极化的作用目的：探讨ICOS-Tg小鼠感染日本血吸虫后，上调ICOSL/ICOS信号对宿主体内Th2极化的影响。方法：分别收集ICOS-Tg及其野生型小鼠感染前0周和感染后4周、7周、12周的脾淋巴细胞，收集经

8、SEA刺激培养72h后的细胞上清，运用ELISA双抗夹心法检测观察上清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-12和Th2型细胞因子IL-4、IL-13的表达水平动态变化。结果：感染小鼠脾细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-12表达水平自感染后4周开始升高（38.98pg/ml；73.50pg/ml），感染后7周达到峰值（62.40pg/ml；119.96pg/ml），感染后12周表达下调（33.02pg/ml；93.36pg/ml），表明病程由急性期转为慢性期时，Th1型