icoslicos信号通路介导th17极化与血吸虫卵肉芽肿免疫应答及肝纤维化形成的分子机制

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2、、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年一月解密后适用本规定。非涉密论文酬论文作者签名：圭2窿日导师签名：缝翊日期：!!!：垦竺万方数据ICOSuICOS信号通路介导Thl7极化与血吸虫卵肉芽肿免疫应答及肝纤维化形成的分子机制中文摘要血吸虫病的发病机制主要是虫卵引发的宿主的肝脏和肠等脏器组织产生肉芽肿病变，并继发纤维化。

3、其实质是由于CD4十T淋巴细胞持续对虫卵抗原发生免疫应答。研究表明，Thl／Th2免疫偏移与血吸虫病虫卵肉芽肿的发生、发展及免疫调节网络密切相关。Thl7和Tfh是近年来备受关注的两个新T细胞亚群。已有研究证实ICOSL／ICOS信号在血吸虫导致的慢性炎症及纤维化形成过程中有重要作用。最新研究表明，ICOS的表达与11117的产生直接相关，亦与Till功能密切相关。本课题应用ICOS转基因及ICOSL敲基因小鼠作为血吸虫病实验动物模型，结合体内外实验共同阐明Thl7细胞介导的血吸虫卵肉芽肿以及肝纤维化形成的分子机制，并初步探讨ICOSL／ICOS信号对Till极化的影响，探

4、索以ICOSL／ICOS信号通路为靶点调节Thl7及Till极化，下调或控制虫卵肉芽肿反应，抑制或防止肝纤维化的发生与进展，寻找控制血吸虫性肝纤维化的新途径。一、ICOSL．KO／ICOS．Tg小鼠感染日本血吸虫病程中Thl7极化相关分子的动态变化目的：探讨ICOSL．KO／ICOS．Tg小鼠感染日本血吸虫后，ICOSL／ICOS信号的增强或减弱对与Thl7极化相关的共刺激分子、转录因子及细胞因子表达水平的影响。方法：在日本血吸虫感染前(0周)和感染早期阶段(4周)、急性病变期(7周)、慢性期(12周)、晚期(16周)应用流式细胞仪检测ICOSL—KO／ICOS-Tg小鼠及

5、其野生型对照小鼠CD4+T淋巴细胞上ICOS、CDl54、IL．17A、RORvt和CDl9+B淋巴细胞上ICOSL、CD40、IL．17R的表达水平。应用免疫组织化学方法检测同期ICOSL．KO／ICOS．Tg小鼠及其野生型对照小鼠肝组织IL-17A的表达水平。结果：流式细胞仪检测结果显示：感染日本血吸虫后野生型小鼠脾CD4+T淋巴细胞上ICOS、CDl54以及脾CDl9+B淋巴细胞上CD40的表达水平从感染4周万方数据ICOSL／ICOS信号通路介导Thl7极化与血吸虫卵肉芽肿免疫应答及肝纤维化形成的分子机制后升高，感染12周后达到峰值，随后缓慢下降。ICOSL—KO小

6、鼠脾CD4+T淋巴细胞上ICOS、CDl54的表达与同期野生型小鼠相比显著下调，ICOS的表达在感染4周后各病期均显著下调。CDl54在感染12周后显著下调。由于ICOSL敲除，在血吸虫感染后各病期CDl9十B淋巴细胞上ICOSL的表达都极低。同时，Thl7特异性的转录因子RORrt以及其重要的作用因子IL．17A在ICOSL．KO小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上的表达均显著下调；ICOS．Tg小鼠的检测结果则恰好相反。免疫组织化学法检测IL．17A在肝组织的表达水平的结果与流式细胞术的结果一致。结论：ICOSL／ICOS信号的缺失可导致Tlll7亚群数量及功能的抑制；而加强该

7、信号则诱导免疫应答向Thl7偏移。二、日本血吸虫感染ICOSL．KO／ICOS．Tg小鼠致病过程中ICOSL／ICOS信号对Thl7极化的影响目的：探讨ICOSL．KO／ICOS．Tg小鼠感染日本血吸虫后，ICOSL／ICOS信号缺失或增强对Tlll7极化的影响。方法：收集感染前(O周)和感染后4周、7周、12周、16周、20周的小鼠脾淋巴细胞，与SEA共培养，诱导72小时后收集培养上清，应用ELISA法检测培养上清中Thl7型细胞因子IL．17、IL．23、IL．6；Th2型细胞因子IL．4、IL．13、TGF．