Caveolin-1对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446生长和侵袭作用的体外分析

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1、Caveolin一1对人小细胞肺癌细胞系NCI．H446生长和侵袭作用的体外研究硕士研究生：指导教师：指导小组：专业名称：叶冬梅邵淑娟教授郝立宏副教授人体解剖学与组织胚胎学摘要目的：恶性肿瘤是当今世界上严重危害人类健康的重大疾病之一，肺癌发病率和死亡率位居恶性肿瘤之首。恶性肿瘤的转移所导致的多脏器功能衰竭是患者死亡的主要原因。目前，临床上防止肿瘤转移是治疗肿瘤的关键之一。随着对肿瘤分子生物学的深入研究，人们发现恶性肿瘤的转移是一个复杂而主动的生物学过程，它包括癌细胞在原发灶增殖、脱落、侵入转移点并增殖，在这个过程中存在着癌基因的激活和抑癌基因的

2、失活等一系列遗传学的改变。Caveolae是细胞膜内陷形成的特殊膜结构，参与细胞的物质运输和信号转导。Caveolin．1是Caveolae中的重要蛋白，与细胞内多种信号分子相互作用。上世纪90年代后期有研究发现，Caveolin．1可以影响细胞的增殖、凋亡、恶性转化及血管的生长：是近年来肿瘤研究的热点之一，但是Caveolin．1与肺癌的相关研究较少，国内外近乎没有系列报道。本文旨在探讨Caveolin．J基因对人小细胞肺癌细胞系NCI．H446生长和体外侵袭力的影响。方法：westernblot检测Caveolin．1在人肺癌细胞系A549

3、、NCI．H460、NCI．H446中的表达。用脂质体法将已构建的Caveolin。J真核表达载体导入到Caveolin-1基因缺失的人小细胞肺癌细胞NCI．H446中，经G418筛选获得可稳定表达Caveolin．J的人小细胞肺癌细胞H．446Cavl阳性克隆和对照阴性克隆H．446neo。westernblot和免疫细胞化学方法鉴定阳性克隆。用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖，结晶紫染色光学显微镜观察细胞形态，用Transwell小室法和划痕实验观察细胞体外侵袭、迁移能力的变化。用westernblot和明胶酶谱方法检测Caveolin．1蛋

4、白表达对MMP．3表达及酶活性的影响，用westernblot方法检测Caveolin．1表达对E．cadherin表达的影响。结果：westernblot检测在人小细胞肺癌细胞NCI．H446中Caveolin一1表达缺失。westernblot和免疫组织化学方法鉴定获得稳定表达细胞克隆：阳性克隆H-446Cavl和阴性克隆H．446neo。通过细胞形态学观测发现，转染目的基因后的细胞形态发生了明显改变，转染前NCI．H446细胞较小，伪足短，细胞呈克隆生长；转染后H446．Cavl细胞体积增大，多突起，细胞生长较分散不呈克隆样生长。生长曲线

5、表明H446．Cavl细胞增殖水平明显低于NCI—H446、H446neo细胞(P<0．05)。Transwell实验结果表明H446．Cavl细胞穿透Matrigel胶细胞数较阴性克隆H．446neo明显增多(P

6、性明显高于H446neo(P

7、关键词：Caveolin．，基因小细胞肺癌肿瘤转移2TheinfluenceofCaveolin．1onNCI．H446celllinegrowthandmetastasisinvitroMasterdegreecandidate：YeDongmeiSupervisor：ProfessorShaoShujnanVice—superisor：ViceProfessorHaoLihongMajor：HumanAnatomyandHistologyandEmbryologyAbstractObjeetive：Malignanttumorisoneof

8、themostdevastatingdiseasesthreateninghumanhealthnowadays，andaroundallofthem