葛根粗提物与葛根素对人小细胞肺癌h446细胞生长的作用与其机制

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1、中立摘罄葛根轲l提物及葛根素对人小细胞肺Il；；H446细胞生K的作用及Jt-学L制方向。因此，本课题拟在CP和sP作用H446细胞后，应用显微镜观察、凋亡形态学观察、M丌法、流式细胞术和细胞免疫化学方法等对其细胞形态、细胞增殖，细胞凋亡和细胞周期等生物学行为，以及与细胞增殖、凋亡和细胞周期相关的蛋白进行研究，了解CP和SP对H446细胞的增殖抑制、摘亡诱导和细胞周期调控的作用，并进一步在蛋白水平阐明其作用机制，从而为CP和sP应用于临床治疗肿瘤提供理论基础。目的1．探讨葛根粗提物及其主要成份葛根素对H4

2、46细胞增殖活力，凋亡率和细胞周期分布的影响，研究CP和sP抑制人小细胞肺癌细胞生长的作用，并对两者的生物学效应进行比较。2．初步探讨葛根粗提物及其主要成分葛根素抑制H446细胞增殖，诱导其凋亡，改变其细胞周期分布的机制．1．采用Mrr法测定不同浓度CP和sP分别作用24、48、72、96、120小时后，H446细胞生长抑制率．2．利用凋亡细胞形态学检测方法，观察CP和sP引起的H446细胞形态学改变．3．通过流式细胞术分析CP和sP作用于H446细胞后，细胞凋亡率和细胞周期分布情况。4．采用细胞免疫化学

3、方法和流式细胞术检测细胞增殖核抗原，细胞凋亡和细胞周期相关蛋白表达情况。结果1．CP和sP均可不同程度的抑制H446细胞的生长，且呈剂量．效应关系和时间．效应关系。2中文摘婴葛根粗提物及葛根素对人小细胞肺癌H446绑胞生K的作用及Je帆制2．相同条件下，CP对H446细胞生长的抑制作用比SP强，差异有统计学意义(P

4、。4．细胞周期分布表明：CP和SP作用于H446细胞后，G0／GI期细胞构成比分别为79．20％和72．200,4。G2／M期细胞构成比分别为8．94％和10．500，与对照组相比，差异均具有统计学意义Cp∞．05)。5．细胞周期动力学显示。CP和sP作用于H446细胞后，细胞增殖指数减少，与对照组相比，差异具有统计学意义(P．弧05)，且CP组细胞增殖指数小于SP组，差异具有统计学意义(P瑚．05)．6．CP作用于H446细胞后，PCNA蛋白表达量减少，与对照组相比，差异有统计学意义(p回．05)，而S

5、P作用于H446细胞后，PCNA蛋白表达量与对照组相比，差异无统计学意义(p'0．05)。7．CP和sP均可使H446细胞Bax蛋白表达上调，Bcl-2蛋白表达下调，Bax／Bcl．2比值升高，与对照组相比，差异具有统计学意义(P

6、如．05)．9．CP和SP作用于H446细胞后，CDK2蛋白表达量减少，与对照组相比，差异具有统计学意义(P如．05)，CP和SP使H446细胞cyclinDl蛋白和CDIG蛋白阴性表达，I'27蛋白阳性表达，且CP使H446细胞cyclinDl和CDK4蛋白的荧光指数低于SP，P27蛋白的荧光指数高于SP，差异均具有统计学意义俨

7、葛根豢对人小细胞肺癌H446细胞生氏的作用及K-OL制3．CP和SP作用于H446细胞后均延长了Go／Gl期，缩短了S期和G2／M期。4．CP可能通过下调PCNA蛋白的表达而抑制H446细胞的增殖。5．CP可能通过调节Bax和Bcl-2蛋白的表达比例而促进H446细胞的凋亡．6．CP可能通过上调Fas蛋白的表达而诱导H446细胞的凋亡．7．CP和sP使H446细胞cyclinDl、CDK2和CDIG蛋白表达下降，P27蛋白表达升高，从而抑制cyclinD-CDIG、cyclinE．CDK2复合物的形成，并

8、且P27有效地与cyclinD-CDIG、cyclinE-CDK2复合物结合，抑制cyclinD-CDIG和cyclinE-CDK2等GI期激酶复合物，阻止细胞通过(31／S期检查点，使细胞阻滞于G1期。关键词葛根粗提物、葛根素，细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期、PCNA、Bax、Bcl-2、Fas、cyclinDl、CDK2、CDK-、P274英文摘要葛根轲【提物及葛根鬃对人d,flJl胞肺癌H446细胞生长的作用及je机制