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1、知识与经验高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中喹乙醇及其代谢物112*11陈永平,张素青,林黎明,李春青,李兆千(1.农业部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心,天津300221;2.山东省出入境检验检疫技术中心,青岛266002)中图分类号:O657.62文献标志码:B文章编号:1001-4020(2011)09-1108-03喹乙醇(OQX)是以邻硝基苯胺为原料合成的蒸发仪。一种抗菌促生长剂,因其具有良好的广谱抗菌效果、OQX及MQCA标准储备溶液:称取OQX、提高畜禽饲料消化率、促生长作用而被广泛应用于MQCA标准品各1.0mg,用乙腈-甲醇-
2、0.1%(体积[1]兽药及饲料添加剂中。但随着对OQX毒性的深分数,下同)甲酸水溶液(8+7+85)的混合溶液溶解-1入研究与评价,普遍认为它是一种基因毒剂和生殖并定容至10mL容量瓶中。配制成100mgL诱变剂,有致突变、致畸作用,并且在动物体内会产标准储备溶液。生蓄积毒性,可通过食物链间接地对人体健康构成pH8磷酸盐缓冲溶液:称取磷酸二氢钠12g[2-3]和磷酸氢二钠14.2g,加水溶解,用1molL-1氢威胁。3-甲基喹啉-2-羧酸是喹恶啉在动物体内[4]氧化钠溶液调pH至8,加水定容至1L,配成的代谢产物,以喹诺酮和OQX为主要代表。摄-1入OQX饲料添
3、加剂后,会在肌肉、肠道、肾脏等组0.1molL磷酸盐缓冲溶液。织中代谢生成3-甲基-喹啉-2-羧酸,这种代谢物对乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂为分析纯,试验[5]用水为二次蒸馏水。机体毒性极大,美国规定猪肉中OQX含量不得高于4gkg-1,欧盟规定OQX及喹乙醇代谢物1.2仪器工作条件1.2.1色谱条件(MQCA)不得检出。AglientXDBC18色谱柱(2.1mm150mm,目前国内外报道了液相色谱法、气相质谱法、液3.5m),流动相:A为乙腈,B为甲醇,C为0.1%相色谱-质谱法检测OQX或MQCA,其中关于饲料-1甲酸水溶液;流量200Lmi
4、n,进样量20L,柱中OQX,鸡肉、牛肉、猪肉组织中MQCA的报道较多[6-9]。高效液相色谱-紫外检测器测定OQX及温30。梯度洗脱程序见表1。MQCA,存在基质复杂、干扰较大,且不能定性的不表1梯度洗脱程序Tab.1Programofgradientelution足。本工作建立了高效液相色谱-串联质谱法同时时间流动相体积分数/%测定水产品中OQX及MQCA的方法,用外标法/minABC定量。0.0106841试验部分4.01068410.01370171.1仪器与试剂12.0133057ThermoFinniganTSQQuantumAccess液相
5、1.2.2质谱条件色谱-串联四极杆质谱联用仪,氮吹仪,离心机,旋转+电喷雾离子源(EIS),电喷雾电压4000V,离收稿日期:2010-05-05子传输管温度350,鞘气压力3.675kPa,辅助气-1*联系人流量5Lmin,碰撞诱导解离电压10V,选择反1108陈永平等:高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中喹乙醇及其代谢物应监测(SRM),正离子模式检测,碰撞气氩气压力滤膜后,按仪器工作条件进行测定,外标法定量。200Pa。其余质谱参数见表2。2结果与讨论表2OQX和MQCA的质谱参数Tab.2MSparametersforOQXandMQCA2.
6、1提取净化条件的选择质荷比m/z碰撞能量试验分别用甲醇(5+95)溶液与乙腈-乙酸乙酯组分母离子子离子/eV(1+1)混合溶液作提取剂,对OQX进行提取,正己OQX263.9220.913烷去脂、过无水硫酸钠柱和HLB小柱,除去基质中143.030的水及大分子杂质,减少对色谱柱、质谱仪的污染。MQCA189.1145.114结果表明:采用乙腈-乙酸乙酯(1+1)混合溶液提102.132取,回收率较甲醇(5+95)溶液提取回收率高。与文[2]1.3试验方法献报道的测定动物组织中OQX和猪粪中[10]1.3.1MQCA的测定OQX方法作比较,净化效果理想。称取鱼肉
7、匀浆试样5.00g,置于50mL玻璃离MQCA带有一个-COOH基团显弱酸性,与-1心管中,加3molL氢氧化钠溶液10mL,置组织中某些蛋白质结合较牢固,通常可采用酸水解、95~100水浴中水解20min。冷却至室温,加碱水解或酶解的方式将目标化合物与蛋白质分离。盐酸4mL,混匀,冷却至室温,加乙酸乙酯10mL,试验分别采用酶水解、酸水解和碱水解3种提取方-1涡旋振荡1min,以4000rmin转速离心5min,式对MQCA进行提取,结果表明:用酶水解时,温上层溶液转入50mL玻璃离心管;用5mL乙酸乙度、pH值对酶活性影响较大,试验过程较难控制,[1
