超高效液相色谱―串联质谱法测定水产品中甜蜜素

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1、超高效液相色谱―串联质谱法测定水产品中甜蜜素　　摘要建立了一种采用超声波提取，经正己烷萃取除去油脂有机物，由超高效液相色谱-串联质谱法定量准确、快速检测水产品中甜蜜素的方法。甜蜜素含量在10～100ng/mL的范围内与峰面积有良好的线性关系，相关系数为0.9997，检出限为0.01mg/kg。添加水平分别为0.1、0.2、0.5mg/kg的样品加标回收率为83.3%～95.6%，测定结果的相对标准偏差均小于5%（n=6）。该方法简便、准确、高效，适用于水产品中甜蜜素测定。　　关键词超高液相色谱-串联质谱法；水产品；甜蜜素　　中

2、图分类号TS207.3文献标识码A文章编号1007-5739（2016）11-0309-01　　甜蜜素（sodiumcyclamate），化学名称为环己基氨基磺酸钠，属人工合成的磺胺类无营养型食品添加剂[1]。其口感好、甜度是蔗糖的30～40倍，价格低廉，被广泛应用到甜味食品中。但人工合成甜味剂的安全性从20世纪70年代开始受到质疑，研究发现食用甜蜜素可能有致癌、致畸、损害肾功能等副作用，美国、英国、日本等经济发达国家开始禁止在食品中使用甜蜜素，中国、欧盟等40余个国家、地区对此也分别作出限制[2]。6　　本研究建立了一种采用

3、超声波提取，经正己烷萃取处去油脂类有机物，由超高效液相色谱-串联质谱法定量准确、快速检测水产品中甜蜜素的方法。其检出限大大降低，结果准确可靠，且样品无需固相萃取过程就可以进样，节约了检测成本，节省了分析时间，提高了分析效率，是控制出口水产品中甜蜜素含量的有效测定方法。为水产品出口企业在加工过程控制甜蜜素添加，满足出口国的甜蜜素的含量要求提供了有力的技术支持。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂　　1.1.1试验仪器。Agilent6210A串联三重四级杆质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；T25basic高速均质器（德国IKA实

4、验仪器公司）；Agilent1290超高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有效公司）；BS2202S电子天平（北京赛多利斯有限公司）；SB-25-12DTS超声波提取器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；L530台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；XK96-A快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）。　　1.1.2试验试剂。乙腈、甲酸均为色谱纯（美国Tedia公司）；甜蜜素标准物质：纯度>99.0%（德国Dr.Ehrenstorfer公司）；试验用水为超纯水。　　1.2标准溶液配制　　准确称取0.0200g甜蜜素标准物质

5、，用纯水溶解定容至100.0mL，得到浓度为200μg/mL的标准储备液；准确移取500μL标准储备液用纯水稀释定容至100.0mL，得到浓度为1.0μg/mL的标准中间液，再逐级稀释成浓度分别为10、20、40、80、100ng/mL的系列标准工作溶液供HPLC-MS/MS测定。　　1.3样品处理　　称取1g均质处理（转速5000r/min）后的糜样（精确至0.01g），置于50mL具塞塑料离心管中，加入106mL纯水，旋涡混匀后，超声提取15min，于4000r/min离心5min；上清液经定量滤纸过滤后，取1mL滤液加入

6、3mL正己烷涡旋萃取，滤液过0.2μmPTFE滤膜，供UPLC-MS/MS测定。　　1.4色谱与质谱条件　　色谱柱：AgilentZORBAXRRHDEclipsePlusC18（3.0mm×100mm，1.8μm）；流动相：0.1%甲酸水溶液-乙腈（体积比70∶30）；流速：0.5mL/min；进样量：2μL；柱温：25℃。　　多反应监测MRM；负离子模式；电喷雾离子源（ESI）；干燥气流速：10L/min；干燥气温度：350℃；毛细管电压：3500V；雾化器压力：50psi；甜蜜素的定性定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数

7、：母离子为178.1，子离子为80.0，驻留时间为200ms，碎裂电压为120V，碰撞能量为25eV。　　2结果与分析　　2.1前处理过程的优化　　检测标准GB/T5009.97―2003及SN/T1948―62007中对甜蜜素的样品处理均采用水浸泡或超声直接处理后检测。在初期试验中对水产品采用前2种方法直接处理，得到的添加回收率均极低，故不适合直接应用上述检测方法。分析原因，2个标准中的甜蜜素的检测对象限定在饮料、糕点和凉果等基质，而水产品中蛋白质、脂肪含量高，属于复杂基质，待测甜蜜素易被大分子蛋白吸附损失或被油脂有机分子包

8、裹后在色谱柱中的保留性质被改变，使得最终质谱检测到的甜蜜素极低。经过大量的试验优化，超声仪的使用减少了提取过程中的蛋白吸附，相比水溶液涡旋得到的回收率更高；而正己烷萃取在水产品处理中更为重要，在某些检测样本中经正己烷处理后，得到的回收率由30%提高到95%以上。故最终采用水溶