Waters_e2695型高效液相色谱仪操作规程

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1、Waterse2695型高效液相色谱仪操作规程目的：建立Waterse2695高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪更规范，保证实验结果更精确。范围：适用于Waterse2695高效液相色谱仪操作和维护保养。职责:新药研发部人员、QC人员对本规程的实施负责。1开机前的准备工作1.1检查设备电源、流路、信号连接是否完好。1.2流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气5分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯

2、水清洗。1.3样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。2仪器的组成及开机平衡系统2.1仪器组成。本仪器由waterse2695分离单元、2489紫外可见光检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。2.2开机。先打开电脑，依次接通2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695分离单元后，

3、约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。2.3脱气（Degasssger）。按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“DegasserMode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。2.4设定柱温及样品室温度（可选项）。在“Status”界面，光标至“ColHtrSet”，输入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按“E

4、nter”。（可在工作站方法中设置）2.5灌注柱塞密封清洗泵（PrimeSealWash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“PrimeSealWash”,显示“PrimeSealWash”屏幕，按“Start”,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt”、“Close”、“Exit”。2.6灌洗针头清洗泵（PrimeNeedleWash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“PrimeNdlWash”,显示“PrimeNeedl

5、eWash”屏幕，按“Start”,30s内应见溶剂从废液排放口流出，按“Close”、“Exit”；若想要多清洗几次时，请按“StartAgain”。2.7湿灌注（WetPrime）。在“Status(1)”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“DirectFunction”键，移动光标选择“WetPrime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通

6、道选25%5ml/min，3min）。2.8冲洗进样器（PurgeInjector）。按“Menu/Status”进入“Staus(1)”画面，在设定溶剂画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定50%乙腈：50%水的溶剂来清洗进样器），按“DirectFunction”键，选择“PurgeInjector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。注：以上2.5-2.8为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复2.8直至排除。2.9平衡柱子。在“Status

7、”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再WetPrime操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。（可在工作站中设置）。3编辑仪器方法和方法组3.1打开电脑后，双击桌面上的Empower，输入用户名system、密码manager，选择“运行样品”。3.2新建仪器方法。进入“运行样品”后，选择“创建方法组”调用方法组编辑向导。出现“新建方法组—选择仪器方法”，单击“新建”来创建新的仪器方法，此时出现“仪器方法编辑器”界面，按相关的要求填写各参数，根据需要编辑不同的方法，编辑完毕后单击“文件”，

8、“另存为”后出现“保存仪器方法”对话框，输入此方法用于的测定药品名称，单击“保存”。3.3新建方法组：选择所需的方法名称，点击“下一步”，输入方法组名（与方法名一致），即完成方法组的建立。4进样4.1在下面的“仪器方法”里选择需要仪器方法并点击“监视器”平衡系统，观察基线。待系统平衡后，点击“中断样品组”开关，终止观察基线。4.2当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”