Waters201型高效液相色谱仪操作规程

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1、Waters201型高效液相色谱仪操作规程一、开机前准备1.实验室温度应保持在10~30℃之间，湿度小于80%。2.根据实验要求，选择合适的柱子，按装柱子,准备相应的流动相并过滤脱气。二、开机1.依次打开510泵、检测器和计算机电源开关，设定合适的波长和AUFS值。2.双击桌面上的HSV4.0图标，进入工作站系统。三、编辑LC分析方法1.双击“方案”图标，输入初始参数。2.双击HSV1.0图标,设定合适的流速和梯度。3.保存所编辑的方法。四、样品分析与采集数据1.在文件栏中选择分析方法文件。2.手动进样:在方案栏中依提示输入文件名称、样品名称、操作者等信息。进标准样并按下进样器手柄，即开始样

2、品分析与数据采集。3.根据标准色谱图进行归一化法、外标法或内标法校正。4.输入样品进行分析与数据采集。五．报告输出1.在界面栏的方案栏中选择打印项。2.选择所要选用的报告格式，输出报告。六、关机1.关机前先用100%甲醇冲洗系统30分钟，关闭泵控系统，退出主界面。2.依次关闭计算机电源，510泵电源，检测器电源。3.关闭电源。4.在记录本记录使用情况。高效液相色谱技术（HPLC）-上核心提示：高效液相色谱技术（HPLC）液相色谱理论发展简况HPLC的特点和优点色谱法分类色谱分离原理基本概念和理论HPLC系统高高效液相色谱技术（HPLC）•液相色谱理论发展简况•HPLC的特点和优点•色谱法分类

3、•色谱分离原理•基本概念和理论•HPLC系统•高效液相色谱技术（HPLC）的原理•HPLC的特点和优点•高效液相色谱技术（HPLC）系统构成•高效液相色谱仪的简易操作•高效液相色谱仪操作步骤•高效液相色谱常见故障的断定及解决•高效液相色谱仪系统使用的常见问题及解决方法•HPLC的正确使用和科学保养•高效液相色谱仪的使用与维护•高效液相色谱仪常见故障处理（以C-10AT为例）•HPLC应用举例•HPLC法在生物碱分析中的应用•HPLC法鉴别五味子与南五味子•HPLC双波长法测定葛根芩连微丸中葛根素、黄芩苷的含量•RP-HPLC测定连翘病毒清胶囊中连翘酯苷和连翘苷的含量•RP-HPLC测定天乐口

4、服液中橙皮苷的含量•RP-HPLC法测定金钱草中槲皮素和山奈素两种黄酮成分的含量•RP-HPLC法测定人血浆中利福喷丁的浓度•Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤•Waters高效液相色谱仪操作规程•1100高压液相色谱仪操作规程 液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离

5、植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidCh

6、romatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75Kg/cm2以上。高速—流速为0.1~10.0ml/min。高效—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快—通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成。分辨率高—可选择固定相和流动相以

7、达到最佳分离效果。灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收—样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液