ultimate3000型高效液相色谱仪操作规程

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1、实用标准文案Ultimate3000型高效液相色谱仪操作规程一、开机前的准备工作1.检查设备电源、流路、信号连接是否完好。2.流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，超声脱气15分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放样品溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。3.样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。二、仪器的组成及开机平衡系统1.仪器组成：本仪器由Ultimate3000分离单元、DAD-3000（RS）检测器、Chromeleon7色谱工作站和打印机组成。U

2、ltimate3000分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。2.开机：依次接通Ultimate3000分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通Ultimate3000分离单元后，仪器开始自检约20s，打开电脑，双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，单击“启动Chromeleon仪器控制器”，激活服务管理器，双击电脑桌面的“Chromeleon7”图标，进入变色龙软件。3.脱气（Dega

3、sssger）：向上掀开泵头前面板，拧松快速清洗阀（逆时针两圈左右），然后按“冲洗”键，泵将以3.0ml/min的速度自动快速清洗泵类残留的气泡，5min将自动停止。若想手动停止，只要再按“冲洗”键，将停止清洗。4.清洗有缓冲盐的那个通道前后，一定要用超纯水清洗管路和泵头，以防止缓冲盐溶液直接与纯有机相混合而产生结晶堵塞比例阀。5.清洗完毕，先停泵，再拧紧快速清洗阀。切记不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。三、编辑仪器方法1.在ChromeleonConsole“创建”菜单中点击“仪器方法”。2.采集时间和采集通道设置：在弹出的“

4、仪器方法向导”精彩文档实用标准文案窗口中输入分析运行时间；在“诊断通道”项下点击“取消选择所有通道”，点击下一步。1.LPG-3400SD泵常规设置：在溶剂名称下面的方框中输入所用流动相的名字，如“%A：水，%D：甲醇”。2.在“压力限值”处的压力下限设置为5bar左右，可防治流动相走完时，仪器空走。压力上限设置为400bar。3.最大流速加速度和减速度可设置为3ml/min2，点击下一步。4.泵流速梯度的设定：在“流速梯度”窗口中，图示为所设定的梯度曲线，下表中列有时间、流速、各通道流动相比例及梯度曲线。点击“删除平衡阶段”，然

5、后再各项下输入相应值，在设定梯度过程中可以点击右边的“插入”行和“删除”行进行编辑。对反相色谱而言，一般梯度过程为水系比例越来越小，有机比例越来越多。5.WPS-3000：自动进样器的常规设置：一般吸取速度设置为2µl/s，吸取延迟为7s，排出速度为10µl/s，取样高度为2mm，进样冲洗设置为BeforeInject，冲洗体积75µl，冲洗速度4µl/s，点击下一步。6.进样模式：分析型液相色谱一般采用默认设置，低压梯度泵需勾选“与泵同步进样”，点击下一步。7.TCC-3100柱温箱常规设置：若需对色谱柱进行精确控温，则勾选“使

6、用温度控制”，然后在“温度”后输入需要的温度值。其他各项均可采用默认值，点击下一步。8.UV（DAD-3000RS）紫外二极管阵列检测器通道设定：二极管阵列检测器可以同时选择4个紫外通道采集数据，可以分别设定需要的检测波长，需要采集3D光谱时要选上3DFIELD，常规分析时可以选一个通道采集数据，一般参比波长选OFF，数据采集频率和相应时间可以通过勾选“使用推荐值”来设置。点击下一步。四、编辑处理方法和报告模板1.在ChromeleonConsole“创建”菜单中点击“仪器方法”。2.选择“二维定量”，HPLC使用DAD检测器时可

7、以选择“三维定量”，点击下一步。输入处理方法名称并选择保存位置，点击完成。3.在ChromeleonConsole“创建”菜单中点击“报告模板”。精彩文档实用标准文案1.HPLC使用DAD检测器时可以选择DefaultDAD，一般的检测器可以选择Default，点击下一步。输入报告模板名称并选择保存位置，点击完成。五、创建一个新的序列文件1.在ChromeleonConsole“创建”菜单的下拉菜单中点击“序列”。2.弹出“新建序列向导”页，在在线仪器框中，选中“HPLC”，点击下一步。依次在“进样名称的格式”、“样品数”、“进样

8、次数”、“开始位置”、“进样量”输入相应值，点击下一步。点击“浏览”为新建的样品序列选择分析时所要采用的仪器方法、处理方法和报告模板。点击下一步，最后输入序列名称并选择保存路径，点击完成。六、样品的分析1.基线的采集和停止：测试样品前必须先平衡仪器