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时间：2019-06-19
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1、实验六 糖发酵试验一、目的要求了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法二、试验原理糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌鉴定中尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异,有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5．2
2、（黄色）-6．8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明三、实验器材1、菌种大肠杆菌，枯草芽孢杆菌斜面各1支；2、培养基盛有葡萄糖发酵培养基的试管和乳糖发酵培养基的试管各2支（内装有倒置的德汉氏小管）3、仪器或其他用具试管架，接种环等。四、操作步骤1、编号用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。2、接种取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种枯草芽孢杆菌，第3支不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管3支，同样1支接种大肠杆菌，1支接种枯草芽孢杆菌，第3支
3、不接种，作为对照。3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温室中培养24小时。4．观察结果。五、实验结果结果将实验结果填入下表。“”表示产酸产气；“+”表示产酸不产气；“-”表示不产酸不产气。菌名糖类发酵大肠杆菌枯草芽孢杆菌对照葡萄糖发酵乳糖发酵六、思考题假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果糖发酵实验培养基葡萄糖０.５％牛肉膏０.５％蛋白胨１％氯化钠０.３％Ｎa2HPO4•12H2O0.2％0.2％溴麝香草酚蓝溶液１.２％（体积分数）蒸馏水配制，pH７.４乳糖发酵培养基乳糖５％蛋白胨０.２％氯化钠０.３％Ｎa2HPO4•12H2
4、O0.2％0.2％溴麝香草酚蓝溶液１.２％（体积分数）蒸馏水配制，pH７.４含有碳酸钙的ＧＹＰ培养基Ａ组分：葡萄糖１％，酵母膏１％，蛋白胨０.５％，牛肉膏０.２％，NAc•7H2O0.2％,微量元素液０.５％,50mg/ml的吐温－８０水溶液１％．Ｂ组分：CaCO30.5％,琼脂２.５％，注：1ml微量元素液中含有：MgSO4•7H2O４０mg,MnSO4•4H2O2mg,FeSO4•7H2O2mg,NaCl2mg.总量：2000ml无菌水：试管三角瓶吸管培养皿斜面
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