发酵工程实验课件.ppt

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1、发酵工程实验实验一、斜面培养基的选择一、实验目的学习菌种斜面培养基选择的方法和原理。二、实验原理良好的斜面培养基能使孢子迅速萌发和生长，菌丝生长快、产生孢子多、孢子产生时间短，从而获得优质的种子液，并缩短发酵的周期。根据菌株在斜面培养基上菌丝生长和孢子产生速度、数量和质量等情况，来选择适当的斜面培养基。三、实验材料菌株：一株链霉菌。培养基成分：葡萄糖、L-天门冬酰胺、K2HPO4、微量盐、琼脂、酵母膏、燕麦片、复合维生素、麦芽膏、马铃薯。其他仪器设备和材料：试管、移量管、灭菌锅、接种环、无菌培养皿、恒温培养箱、超净工作台、酒精灯、无菌水等。四、实验步骤1．培养基配制和灭菌

2、：1#：可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO4·3H2O0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.6。2#培养基：酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏5g，复合维生素3.5mg，微量盐1ml，琼脂20g，定容至1L，pH7.2；3#培养基：燕麦片20g（煮沸30分钟，8层纱布过滤），微量盐1ml，琼脂20g，定容至1L，pH7.2；4#：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.6。采用湿热灭菌，灭菌温度为121℃，时间30mi

3、n。2．培养基灭菌及试管斜面制作。3．斜面接种：用接种环取配制好的链霉菌孢子悬液一环，在长度一样的斜面上分别涂布接种，28°C恒温箱内培养。4．菌丝形态和孢子产生观察：每24h观察菌丝生长和孢子产生情况，第3d开始每天取一支斜面加入5ml无菌水，振荡均匀，用移量管从试管中取0.1ml涂布在平板上，28°C下培养，3d后观察并记录菌落数。五、注意事项1．试管采用同一规格，培养基装量一致，斜面长度一致，以免影响结果。2．斜面接种量用同一接种环，以确保接种量一致。3．整个过程在无菌操作下完成。六、实验结果及分析对实验所观察到的现象、实验结果进行分析，选择该菌株的斜面培养基。七、

4、思考题斜面培养基必须满足什么条件？不同菌株的斜面培养基是否相同？为什么？如何设计斜面培养基？实验一具体安排1、斜面接种后第三天（星期六）每组每天分配2人进行取样，检测斜面生长情况和孢子的产生情况。（大家最好把时间安排好，共用移液管）0.1ml孢子悬液涂布培养计数2、记录连续三天计数结果，确定生长好、产生孢子数量多的斜面培养基实验报告的写法题目：一株链霉菌斜面培养基的选择1材料与方法1.1材料1.2方法2结果与分析3讨论实验二、种子培养基的选择一、实验目的学习发酵生产种子培养基选择的方法和原理。二、实验原理种子培养基主要是为菌丝的生长繁殖提供营养，所以应保证其营养成分易被菌

5、体吸收利用，通常是以菌体生长速度和菌体浓度来选择种子培养基。在一定时间内，菌丝体生长快则生长量大，生长量大菌体密度就大。在一定范围内，菌体密度越大，其吸光度就越大，根据吸光度的大小可以初步检测其菌体密度，进一步确定种子液的生长情况。一定体积的种子液其菌体湿重或干重大，则其生长量大，根据菌丝体湿重或干重的大小就可以确定种子液的生长情况，从而确定适当的种子培养基。三、实验材料菌种：实验一保存的生长良好的斜面。培养基成分：酵母膏，葡萄糖，麦芽膏，复合维生素，微量盐，淀粉，牛肉膏，蛋白胨，CaCO3等。其他仪器设备和材料：分光光度计，移量管，灭菌锅，接种环，无菌培养皿，恒温培养箱

6、，超净工作台，酒精灯，三角瓶，纱布，无菌水等。四、实验步骤1．培养基配制及灭菌：1#培养基：酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏10g，复合维生素3.5mg，微量盐1ml，定容至1L，pH7.2。2#培养基：淀粉24g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏5g，蛋白胨3g，CaCO34g，定容至1L，pH7.0。500ml三角瓶装液体种子培养基100ml，8层纱布封口。采用湿热灭菌，灭菌温度为121℃，时间30min。2．孢子悬液的制备：取2支生长良好的斜面菌种，各注入5ml无菌水，充分振荡，将孢子从斜面上洗脱，倒入无菌三角瓶备用。3．接种及培养：用移量管取4ml孢子悬液，接入待选择

7、的种子培养基中，置于28℃、180rpm的摇床上进行培养。4．菌丝体生长状况观察：1d后每12h取样检测。每次取样10ml，先进行吸光度的检测（分光光度计用未接种的种子培养基进行调零），再全部倒入预先干燥称重的滤纸内进行过滤，用无菌水洗涤菌体3次，除去水溶性杂质，称重，记录菌丝体湿重，用放入60℃电热鼓风干燥箱中进行干燥至恒重，称重，记录菌丝体干重。五、注意事项1．孢子悬液制备和种子液的取样都要进行严格的无菌操作，防止杂菌污染。2．注意要充分洗去水溶性的杂质，以免影响实验结果。3．干燥时间要适宜。六、实验结果及分析对实验所观察