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时间:2020-07-31
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1、发酵工程实验实验一、斜面培养基的选择一、实验目的学习菌种斜面培养基选择的方法和原理。二、实验原理良好的斜面培养基能使孢子迅速萌发和生长,菌丝生长快、产生孢子多、孢子产生时间短,从而获得优质的种子液,并缩短发酵的周期。根据菌株在斜面培养基上菌丝生长和孢子产生速度、数量和质量等情况,来选择适当的斜面培养基。三、实验材料菌株:一株链霉菌。培养基成分:葡萄糖、L-天门冬酰胺、K2HPO4、微量盐、琼脂、酵母膏、燕麦片、复合维生素、麦芽膏、马铃薯。其他仪器设备和材料:试管、移量管、灭菌锅、接种环、无菌培养皿、恒温培养箱、超净工作台、酒精灯、无菌水等。四、实验步骤1.培养基配制和灭菌
2、:1#:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl0.5g,K2HPO4·3H2O0.5g,MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O0.01g,琼脂15~20g,水1000ml,pH7.4~7.6。2#培养基:酵母膏4g,葡萄糖4g,麦芽膏5g,复合维生素3.5mg,微量盐1ml,琼脂20g,定容至1L,pH7.2;3#培养基:燕麦片20g(煮沸30分钟,8层纱布过滤),微量盐1ml,琼脂20g,定容至1L,pH7.2;4#:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,琼脂15~20g,水1000ml,pH7.4~7.6。采用湿热灭菌,灭菌温度为121℃,时间30mi
3、n。2.培养基灭菌及试管斜面制作。3.斜面接种:用接种环取配制好的链霉菌孢子悬液一环,在长度一样的斜面上分别涂布接种,28°C恒温箱内培养。4.菌丝形态和孢子产生观察:每24h观察菌丝生长和孢子产生情况,第3d开始每天取一支斜面加入5ml无菌水,振荡均匀,用移量管从试管中取0.1ml涂布在平板上,28°C下培养,3d后观察并记录菌落数。五、注意事项1.试管采用同一规格,培养基装量一致,斜面长度一致,以免影响结果。2.斜面接种量用同一接种环,以确保接种量一致。3.整个过程在无菌操作下完成。六、实验结果及分析对实验所观察到的现象、实验结果进行分析,选择该菌株的斜面培养基。七、
4、思考题斜面培养基必须满足什么条件?不同菌株的斜面培养基是否相同?为什么?如何设计斜面培养基?实验一具体安排1、斜面接种后第三天(星期六)每组每天分配2人进行取样,检测斜面生长情况和孢子的产生情况。(大家最好把时间安排好,共用移液管)0.1ml孢子悬液涂布培养计数2、记录连续三天计数结果,确定生长好、产生孢子数量多的斜面培养基实验报告的写法题目:一株链霉菌斜面培养基的选择1材料与方法1.1材料1.2方法2结果与分析3讨论实验二、种子培养基的选择一、实验目的学习发酵生产种子培养基选择的方法和原理。二、实验原理种子培养基主要是为菌丝的生长繁殖提供营养,所以应保证其营养成分易被菌
5、体吸收利用,通常是以菌体生长速度和菌体浓度来选择种子培养基。在一定时间内,菌丝体生长快则生长量大,生长量大菌体密度就大。在一定范围内,菌体密度越大,其吸光度就越大,根据吸光度的大小可以初步检测其菌体密度,进一步确定种子液的生长情况。一定体积的种子液其菌体湿重或干重大,则其生长量大,根据菌丝体湿重或干重的大小就可以确定种子液的生长情况,从而确定适当的种子培养基。三、实验材料菌种:实验一保存的生长良好的斜面。培养基成分:酵母膏,葡萄糖,麦芽膏,复合维生素,微量盐,淀粉,牛肉膏,蛋白胨,CaCO3等。其他仪器设备和材料:分光光度计,移量管,灭菌锅,接种环,无菌培养皿,恒温培养箱
6、,超净工作台,酒精灯,三角瓶,纱布,无菌水等。四、实验步骤1.培养基配制及灭菌:1#培养基:酵母膏4g,葡萄糖4g,麦芽膏10g,复合维生素3.5mg,微量盐1ml,定容至1L,pH7.2。2#培养基:淀粉24g,牛肉膏3g,葡萄糖1g,酵母膏5g,蛋白胨3g,CaCO34g,定容至1L,pH7.0。500ml三角瓶装液体种子培养基100ml,8层纱布封口。采用湿热灭菌,灭菌温度为121℃,时间30min。2.孢子悬液的制备:取2支生长良好的斜面菌种,各注入5ml无菌水,充分振荡,将孢子从斜面上洗脱,倒入无菌三角瓶备用。3.接种及培养:用移量管取4ml孢子悬液,接入待选择
7、的种子培养基中,置于28℃、180rpm的摇床上进行培养。4.菌丝体生长状况观察:1d后每12h取样检测。每次取样10ml,先进行吸光度的检测(分光光度计用未接种的种子培养基进行调零),再全部倒入预先干燥称重的滤纸内进行过滤,用无菌水洗涤菌体3次,除去水溶性杂质,称重,记录菌丝体湿重,用放入60℃电热鼓风干燥箱中进行干燥至恒重,称重,记录菌丝体干重。五、注意事项1.孢子悬液制备和种子液的取样都要进行严格的无菌操作,防止杂菌污染。2.注意要充分洗去水溶性的杂质,以免影响实验结果。3.干燥时间要适宜。六、实验结果及分析对实验所观察
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