肿瘤相关抗原及其抗体抑瘤作用的研究

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1、分类号Q93密级UDC579编号中国科学院研究生院博士学位论文肿瘤相关抗原及其抗体抑瘤作用的研究冯静指导教师阎锡蕴研究员博士中国科学院生物物理研究所申请学位级别博士学位学科专业名称微生物学论文提交日期2005.7.论文答辩日期2005.7.25培养单位中国科学院微生物研究所学位授予单位中国科学院研究生院答辩委员会主席孟广震摘要本研究目的是筛选新的肿瘤靶抗原，研制用于肿瘤诊断和肿瘤靶向治疗的抗体。与基因差异显示及消减杂交等筛选肿瘤靶抗原的策略不同，本研究利用抗体差异筛选法发现和鉴定肿瘤特异抗原，通过细胞及动物实验评价肿瘤抗原及其抗体在肿瘤诊断和治疗中的

2、意义。在以结直肠癌细胞系LS174T的活细胞为抗原免疫小鼠得到的单克隆抗体中，通过ELISA及免疫组化等方法筛选出一株肿瘤相关的单克隆抗体CC4；用生化及细胞免疫荧光等方法对其抗原的鉴定结果表明，CC4抗原是一个130kDa的CEA相关蛋白。体外实验表明，抗体CC4可以抑制肿瘤细胞的增殖、黏附和迁移。荷人瘤小鼠动物实验表明抗体CC4对LS174T结直肠癌肿瘤生长具有明显的抑制作用，抑制率为57.26%，显示了CC4具有成为肿瘤治疗性抗体的潜在应用价值。为了构建人源化CC4抗体，通过RT-PCR的方法克隆了CC4抗体可变区的编码基因，并构建了其scFv

3、，为抗体CC4的应用奠定了基础。T2-2是以LS174T细胞的裂解物为抗原免疫小鼠得到的一株单克隆抗体，该抗体具有三个特点：（1）特异识别分子量为46kD的细胞角蛋白；（2）抗体T2-2不同于其它抗细胞角蛋白抗体（多数抗体通常与多种细胞角蛋白交叉反应），该抗体只识别46kD细胞角蛋白多肽上的单一抗原表位，与其它细胞角蛋白没有交叉反应；（3）单克隆抗体T2-2适用于多种免疫实验技术，包括ELISA、免疫组化、细胞免疫荧光及WesternBlot等，而且适用于多种固定剂。以上结果表明，单克隆抗体T2-2将成为细胞角蛋白功能研究和肿瘤诊断的有力工具。在SA

4、RS流行期间，以灭活的SARS-CoV完整病毒颗粒为抗原，用固相筛选法从大容量的天然人抗体库中筛选到一株SAR-CoV特异性的scFv，对基于抗体的SARS的诊断和防治具有应用价值。关键词：肿瘤相关抗原，单克隆抗体，SARS冠状病毒ITumor-AssociatedAntigenandtheInhibitionofTumorGrowthbyTAA-specificAntibodyJingFeng(Microbiology)DirectedbyXiyunYanABSTRACTThisstudyaimsatthediscoveryofnoveltumor

5、targetusinganantibody-baseddifferentiatingselection,andthedevelopmentofitsspecificantibodyfortumordiagnosisandantibody-basedtherapy.Amonoclonalantibody,CC4,wasselectedfromthehybridomasestablishedwiththeimmunizationofthelivingcellsofacolorectalcarcinomacellline,LS174T.Thebiochem

6、icalcharacterizationandidentificationwithELISA,immunohistochemistry,immunofluorescencesandWesternBlotshowedthatCC4antigenwasa130kD-proteincorrelatedwithCEA.TheinvitroassayshowedtheinhibitoryeffectsofCC4ontheproliferation,adhesionandmotilityoftumorcells,andtheinvivoassayshowedit

7、sinhibitoryeffectonthegrowthofLS174T-derivedtumorinxenograftedmodel,theinhibitionrateofwhichwas57.26%.ThecodingsequenceofthevariableregionofCC4wasclonedwithRT-PCR,andCC4scFvwasconstructedforthefuturedevelopmentofhumanizedantibodyandantibody-conjugatesfortherapeuticapplication.L

8、S174Tlysatewasusedtoimmunizethemouse,andanothermonoclo